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I. 2. Ergebnisse
konnten durch verschiedene PCR-Experimente unter Verwendung von cDNA als
Matrize noch 382 Nukleotide untranslatierte Sequenz in der mRNA identifiziert wer-
den, so dass nun 1081 Nukleotide der nanos-mRNA bekannt sind (s. Anhang). 453
bp kodieren für ein kleines putatives NANOS-Protein mit 149 Aminosäuren (AS)
Länge und einem Molekülgewicht von ca. 17,4 Kilodalton (kDa). Diese Größe ist
durchaus vergleichbar mit den Proteinen anderer Insektenarten, wie z.B. dem Ortho-
log der Heuschrecke Schistocerca americana mit 177 AS (AAO38523) oder Apis
meliferra (NP_001035321, 120 AS).
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NANOS ist ein RNA-bindendes Protein, mit einer Zink-Finger-Domäne des
CCHC-Typs im C-terminalen Bereich (Curtis et al., 1995; Curtis et al., 1997; Arriza-
balaga und Lehmann, 1999). Sie liegt im Falle des Tribolium-Proteins zwischen den
Cysteinen 68 und 119. NANOS-Proteine sind über Speziesgrenzen relativ gering
konserviert (Abb. 6, Tab. 1; Curtis et al., 1995; Curtis et al., 1997) und somit wohl
verhältnismäßig schnell evolvierend. Innerhalb der aus zwei Zink-Fingern bestehen-
den funktionellen Domäne liegt die Sequenzidentität zwischen den Tribolium und
Drosophila-Proteinen bei 46% (Abb. 6, A). Auch hier ist die Größenordnung ähnlich
wie bei Vergleichen von NANOS-Proteinen anderer Insektenarten (Tab. 1). Die
charakteristische Struktur der Zink-Finger Domäne erlaubt jedoch eine eindeutige
Identifizierung der Orthologen. Die wesentlichen Aminosäuren der beiden Zink-
Finger sind bezüglich ihrer Identität und ihrer Lage zueinander innerhalb des gesam-
ten Tierreichs hoch konserviert (Abb. 6). Diese klar definierte Struktur ist auch durch
intensive Sequenzsuchen nach einzelnen Teilbereichen im Tribolium-Genom nur
einmal zu identifizieren, Tribolium besitzt also nur ein einziges nanos-Ortholog.
Für die RNAi-Experimente im Rahmen dieser Arbeit wurde ein Fragment des na-
nos-Gens verwendet, das den Großteil der kodierenden Sequenz und 382 bp nicht
translatierte Sequenzen des 3’ Bereichs enthält (gesamt: 810 bp).