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II. 4. Material und Methoden
Bei sehr wenigen Eiern wird ein Quetschpräparat hergestellt, wenn viele schlupf-
reife Larven sichtbar sind. Bei vielen scheinbar unentwickelten Eiern wird nicht
gequetscht. Die Präparate werden über Nacht bei 60°C inkubiert.
8) Auswertung der Kutikulapräparate
Die Auswertung der Präparate am Fluoreszenz-Mikroskop erfolgt zu unterschied-
lichen Zeitpunkten. Verwendet wird ein YFP-Filter und eine Dunkelfeldeinstellung des
Mikroskops. Die Präparate werden zunächst unter Verwendung eines 10fach Objek-
tivs in horizontalen Linien „gescannt“. Dabei wird auf deutliche Veränderungen der
Morphologie und die Zahl an nicht-entwickelten Embryonen geachtet. Hierfür emp-
fiehlt sich die Dunkelfeldeinstellung. Anhand des Dotters sind dann nicht entwickelte
Eier gut von leeren Eihüllen (Larve geschlüpft) zu unterscheiden. Defekte werden bei
höherer Vergrößerung (20fach - 40fach Objektiv) analysiert und charakterisiert, um
dann ihre Häufigkeit zu bestimmen. Werden keine deutlichen Veränderungen festge-
stellt, werden ca. 25 % der Larven, mindestens aber fünf Tiere, im Detail (20fach -
40fach Objektiv) auf subtile Veränderungen der Morphologie (va. Kopfborstenmuster,
Mundwerkzeuge, Beine) untersucht.
! Festhalten und Dokumentation von Veränderungen der Eiform und -größe.
! Festhalten des Anteils nicht-entwickelter Eier.
! Festhalten und Dokumentation morphologischer Veränderungen, also embry-
onaler Phänotypen, und deren Häufigkeit.
(H) Die zu screenenden morphologischen Aspekte sollen zur Orientierung der
Screener auf einer „Screening-Tafel“ zusammengefasst sein.
9) Lebendpräparate herstellen und auswerten (Tag 14)
Nach 72-stündiger Inkubation Embryonen und geschlüpfte Larven umschütten
und dechorionisieren wie in Schritt 7 beschrieben. Mit einem Pinsel je die Hälfte der
Eier und Larven eines Geleges in je einen Tropfen Voltaleföl (10s) auf einem Objekt-
träger überführen, und die eine Hälfte als Quetschpräparat (siehe Schritt 7) die
andere Hälfte ungequetscht einbetten. Bei wenigen Eiern/Tieren zunächst nicht
quetschen, gegebenenfalls nach einer ersten Inspektion noch quetschen.
Die Auswertung am Fluzoreszenz-Mikroskop muss am gleichen Tag durchgeführt
werden. Zur Analyse eines Injektionsblocks von 30 Injektionen muss der Screener
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