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II. 4. Material und Methoden
Phenolrot, Sigma) gelöst und per Spektrophotometrie die Konzentration bestimmt
(typischerweise zwischen 3 und 4 !g/!l). Die RNA wurde auf ca. 1 !g/!l verdünnt
(Injektionspuffer mit 4% Phenolrot, Sigma), wobei für die Berechnung 5 % der ge-
messenen Konzentration abgezogen wurden, um trotz eventueller Messfehler die
ausreichende Konzentration zu erhalten.
Abb. 39: Zusammenfassung der Sequenzierungsergebnisse der Matrizen zur dsRNA-
Synthese
Das Diagramm zeigt das Ergebnis der Matrizen-Synthese für die dsRNA-Synthese. Von 227
durchgeführten PCRs zeigten 179 eine Insertgröße zwischen 450 und 2000 bp. Davon
erwiesen sich nach der Sequenzierung 18 % als nicht auswerbar, weil sie entweder, wahrscheinlich
wegen zu geringer Konzentration, nicht sequenzierbar waren, das Sequenzierergebnis
nicht eindeutig ausgewertet werden konnte, sie Doppelsignale zeigten, oder einen
Mikrosatelliten enthielten. 14 % konnten als ribosomale, 11 % als mitochondriale Gene
identifiziert werden. Die restlichen 58 % representierten weitere annotierte und nicht annotierte
Transkriptionseinheiten des Tribolium-Genoms. Insgesamt 11 % der Fragmente fanden
sich mehrfach, die Hälfte davon ribosomale und mitochondriale Gene.
Die erhaltenen Sequenzen sind auf einer CD die dieser Arbeit beiliegt gespeichert.
4.2. Detaillierte Durchführungsanweisung zum iBeetle Screening
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Schema
Im Folgenden werde ich, in detaillierterer Form als an dieser Stelle üblich, auf die
Durchführung der Injektionen und Auswertungen im Rahmen des iBeetle-Pilot-
Screens eingehen. Diese Aufstellung kann so als Durchführungsanweisung für
iBeetle genutzt werden.