Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

II. 3. Diskussion
nach den gleichen Methoden und denselben Arbeitsplänen vorgehen, und anderer-
seits die Bedingungen an den beiden Screening-Centern (einschließlich Temperatur
und Luftfeuchtigkeit) möglichst exakt angeglichen werden.
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Um dies zu gewährleisten, ist die Einarbeitung der Screener von zentraler Be-
deutung. Dabei sind sicherlich die Durchführung der Injektionen und die Auswertung
und Dokumentation der Ergebnisse die wichtigsten Aspekte. Aber auch die Präpara-
tion der Ovare, die Prozessierung der injizierten Tiere und die Vermeidung von
Kreuzkontaminationen muss mit gleich bleibender Sorgfalt erfolgen. Bei der geringen
Zahl an Tieren mit denen in diesem Screen gearbeitet wird, kann der Verlust oder die
Verschleppung weniger Tiere bei Absiebe- oder Transferschritten durchaus Ergeb-
nisse verändern. Als eine Möglichkeit der Qualitätskontrolle der praktischen Durch-
führung sollte neben Puffer-Injektionen am Beginn und am Ende jedes Injektionstags
auch die Verwendung von zufällig eingestreuten Positiv-Kontrollen erwogen werden.
Für die Gewährleistung hoher Qualität der Screeningergebnisse ist außerdem die
regelmäßige Kommunikation der Screener äußerst wichtig. Dies soll über Telefon-
konferenzen und einen iBeetle-Blog realisiert werden. Durch diesen engen Kontakt
kann schnell auf unvorhergesehene Schwierigkeiten reagiert werden und der
Screen-Ablauf im gegenseitigen Austausch in Frage gestellt und optimiert werden.
Wichtige Punkte sind dabei speziell zu Beginn des iBeetle-Screens die Durchführung
und Zahl der Injektionen, der Erfolg der Auswertungen und die sinnvolle Definition
der Phänotyp-Kategorien. Der Grundstein dieser Kommunikation und des techni-
schen Trainings soll zu Beginn des iBeetle-Screens im Rahmen eines ca. einwöchi-
gen Kurses gelegt werden. Dieses „kick-off Meeting“ sollte auch genutzt werden um
die Motivation der Studenten und ihre Verantwortung für das gesamte iBeetle-Projekt
sowie das Gemeinschaftsgefühl des iBeetle-Teams zu stärken (Peterson, 2007). Die
anspruchsvolle Screening-Arbeit erfordert hohen persönlichen Einsatz, der nur durch
positive Identifikation mit dem Gesamt-Projekt und dem beteiligten Team gewährleis-
tet werden kann.
3.2.3. Der Pilot-Screen macht die Effektivität eines RNAi-Screens deut-
lich
Der Pilot-Screen zeigte nicht nur, dass die Methodik durchführbar ist und dabei
geeignet Phänotypen zu detektieren, er macht außerdem die hohe Effektivität eines
RNAi-Screens in Tribolium deutlich. So konnten in wenigstens 17 der larvalen und in