Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...
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II. 3. Diskussion<br />
nach den gleichen Methoden und denselben Arbeitsplänen vorgehen, und anderer-<br />
seits die Bedingungen an den beiden Screening-Centern (einschließlich Temperatur<br />
und Luftfeuchtigkeit) möglichst exakt angeglichen werden.<br />
198<br />
Um dies zu gewährleisten, ist die Einarbeitung der Screener von zentraler Be-<br />
deutung. Dabei sind sicherlich die Durchführung der Injektionen und die Auswertung<br />
und <strong>Dokument</strong>ation der Ergebnisse die wichtigsten Aspekte. Aber auch die Präpara-<br />
tion der Ovare, die Prozessierung der injizierten Tiere und die Vermeidung von<br />
Kreuzkontaminationen muss mit gleich bleibender Sorgfalt erfolgen. Bei der geringen<br />
Zahl an Tieren mit denen in diesem Screen gearbeitet wird, kann der Verlust oder die<br />
Verschleppung weniger Tiere bei Absiebe- oder Transferschritten durchaus Ergeb-<br />
nisse verändern. Als eine Möglichkeit der Qualitätskontrolle der praktischen Durch-<br />
führung sollte neben Puffer-Injektionen am Beginn und am Ende jedes Injektionstags<br />
auch die Verwendung von zufällig eingestreuten Positiv-Kontrollen erwogen werden.<br />
Für die Gewährleistung hoher Qualität der Screeningergebnisse ist außerdem die<br />
regelmäßige Kommunikation der Screener äußerst wichtig. Dies soll über Telefon-<br />
konferenzen und einen iBeetle-Blog realisiert werden. Durch diesen engen Kontakt<br />
kann schnell auf unvorhergesehene Schwierigkeiten reagiert werden und der<br />
Screen-Ablauf im gegenseitigen Austausch in Frage gestellt und optimiert werden.<br />
Wichtige Punkte sind dabei speziell zu Beginn des iBeetle-Screens die Durchführung<br />
und Zahl der Injektionen, der Erfolg der Auswertungen und die sinnvolle Definition<br />
der Phänotyp-Kategorien. Der Grundstein dieser Kommunikation und des techni-<br />
schen Trainings soll zu Beginn des iBeetle-Screens im Rahmen eines ca. einwöchi-<br />
gen Kurses gelegt werden. Dieses „kick-off Meeting“ sollte auch genutzt werden um<br />
die Motivation der Studenten und ihre Verantwortung für das gesamte iBeetle-Projekt<br />
sowie das Gemeinschaftsgefühl des iBeetle-Teams zu stärken (Peterson, 2007). Die<br />
anspruchsvolle Screening-Arbeit erfordert hohen persönlichen Einsatz, der nur durch<br />
positive Identifikation mit dem Gesamt-Projekt und dem beteiligten Team gewährleis-<br />
tet werden kann.<br />
3.2.3. Der Pilot-Screen macht die Effektivität eines RNAi-Screens deut-<br />
lich<br />
Der Pilot-Screen zeigte nicht nur, dass die Methodik durchführbar ist und dabei<br />
geeignet Phänotypen zu detektieren, er macht außerdem die hohe Effektivität eines<br />
RNAi-Screens in Tribolium deutlich. So konnten in wenigstens 17 der larvalen und in