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II. 3. Diskussion
jeweils zu Beginn und am Ende eines Injektionstages durchgeführt, und sollten im
Hauptscreen beibehalten werden. Dadurch wird den Screenern eine kurze tägliche
Einarbeitung ermöglicht und der nachlassenden Konzentration am Ende eines Injek-
tionstages Rechnung getragen, ohne die tatsächlichen RNA-Injektionen zu beein-
trächtigen. Möglicherweise sollten zudem für beide Injektionen im Hauptscreen
einige Faktoren standardisiert werden, wie beispielsweise die Menge der injizierten
dsRNA, die maximale Stärke der verwendeten Nadel und die Injektionsstelle. Außer-
dem sollte im Falle des larvalen Screens überprüft werden, ob die Dauer der Kryoa-
nästhesie und die Menge des dabei entstehenden Kondenswassers einen Einfluss
auf die Überlebensrate hat.
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Vor dem Beginn des Hauptscreens sollte außerdem das Auftreten von Entwick-
lungsdefekten in den verwendeteten Stämmen überprüft werden. Die Stämme, die im
Hauptscreen zur Verwendung kommen, entsprechen genetisch nicht exakt den im
Pilotscreen verwendeteten, da zusätzliche Marker eingekreutzt und männliche Käfer
anderer Stämme zur Verpaarung genutzt werden. Innerhalb der Tribolium-
„Community“ gilt trotz fehlender Studien als anerkannt, dass sich verschiedene
Labor-Stämme in der Art und Häufigkeit der natürlich autretenden Entwicklungsde-
fekte unterscheiden können. Um diesen genetischen Hintergrund der zu verwenden-
den Stämme zu bestimmen und genetische Prävalenzen, also einen für bestimmte
Phänotypen sensitivierten genetischen Hintergrund (St Johnston, 2002), auszu-
schließen, sollten sowohl Test-Kutikulapräparationen von nicht-injizierten, als auch
von mit Kontroll-RNAs injizierten Tieren ausgewertet werden.
3.2.2. Der Pilot-Screen zeigt kritische Aspekte der Screen-
Durchführung auf
Abgesehen von den genannten technischen Aspekten, die einige wenige weitere
Vorarbeiten empfehlen, wurden im Laufe des Pilotscreens einige Punkte deutlich,
deren Beachtung bei der Durchführung des Hauptscreens eine wesentliche Rolle
spielt, und die ich deshalb hier aufgreifen möchte.
Die Grundlage für den Erfolg des iBeetle-Projekts ist die professionelle Herstel-
lung der verwendeten dsRNAs. Dabei muss durch strengste Sorgfalt und effektives
Qualitätsmanagement eine gleich bleibende Qualität und Konzentration der RNAs
gewährleistet und Kreuzkontaminationen unbedingt vermieden werden. Durch die