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II. 3. Diskussion
3.2. Der Pilotscreen illustriert die Chancen und Risiken des
Hauptscreens
3.2.1. Technische Verbesserungen könnten die Effizienz des Haupt-
screens noch erhöhen
Die Durchführung des Pilotscreens zeigte, dass ein genomweiter RNAi-Screen in
Tribolium realisierbar und vielversprechend ist. Nichtsdestotrotz zeigte er auch einige
Punkte auf, die möglicherweise bis zum Beginn des iBeetle-Screens noch verbessert
werden sollten, bzw. denen erhöhte Beachtung zukommen sollte.
Beispielsweise erwies sich die Detektion von früh-embryonal-letalen Defekten als
noch nicht ausgereift. So war es im Verlauf des Pilotscreens nicht möglich, Embryo-
nen, deren Entwicklung noch vor der Bildung eines Keimrudiments zum Erliegen
kam, von nicht entwickelten oder nicht befruchteten Eiern zu unterscheiden. Mögli-
cherweise könnte diese Diskriminierung durch die Zugabe eines fluoreszenten DNA-
Farbstoffs (z.B. Hoechst 33342) und/oder eines fluoreszenten Phalloidins deutlich
verbessert werden. Da ein Teil der Embryonen in den hier zur Debatte stehenden
Lebend-Präparaten durch mechanischen Druck aus der Eihülle befreit werden,
könnten die verwendeten Farbstoffe das embryonale Gewebe erreichen. Hierbei
muss aber noch getestet werden, ob die Diffusion der Moleküle in dem viskosen
Einbettungsmedium (Voltalef-Öl) ausreichend ist. Alternativ könnten andere viskose
Einbettungsmedien getestet werden, wobei sich eine 50 %ige Glycerolverdünnung
bereits als weniger gut geeignet erwies, da diese häufiger zu Schäden des GFP-
positiven Gewebes führte. Einen weiteren Hinweis auf initiierte Embryonalentwick-
lung könnte der beginnende Abbau des Dotters liefern (Petavy, 1986), inwieweit dies
aber ohne weitergehende Analysen feststellbar ist, bliebe zu testen. Gleiches gilt für
die Analyse des im Hauptscreen zusätzlich zu Verfügung stehenden Fluoreszenz-
markers innerhalb des Zentralnervensystems, der möglicherweise die Detektion
differenzierten Gewebes erlaubt.
Ein weiterer Punkt, der vor Beginn des Hauptscreens möglicherweise noch
verbessert werden sollte, ist die Durchführung der Injektionen. Die fehlende Routine
der Screener des Pilot-Screens, und die noch nicht perfektionierte Technik kommen
in dem Befund zum Ausdruck, dass einige der als Negativ-Kontrollen durchgeführten
Injektionen zur Letalität der injizierten Tiere führten (drei von zwölf im pupalen und
sechs von sechzehn im larvalen Screen-Teil). Diese Kontroll-Injektionen wurden
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