Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...
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II. 3. Diskussion<br />
3.2. Der Pilotscreen illustriert die Chancen und Risiken des<br />
Hauptscreens<br />
3.2.1. Technische Verbesserungen könnten die Effizienz des Haupt-<br />
screens noch erhöhen<br />
Die Durchführung des Pilotscreens zeigte, dass ein genomweiter RNAi-Screen in<br />
Tribolium realisierbar und vielversprechend ist. Nichtsdestotrotz zeigte er auch einige<br />
Punkte auf, die möglicherweise bis zum Beginn des iBeetle-Screens noch verbessert<br />
werden sollten, bzw. denen erhöhte Beachtung zukommen sollte.<br />
Beispielsweise erwies sich die Detektion von früh-embryonal-letalen Defekten als<br />
noch nicht ausgereift. So war es im Verlauf des Pilotscreens nicht möglich, Embryo-<br />
nen, deren Entwicklung noch vor der Bildung eines Keimrudiments zum Erliegen<br />
kam, von nicht entwickelten oder nicht befruchteten Eiern zu unterscheiden. Mögli-<br />
cherweise könnte diese Diskriminierung durch die Zugabe eines fluoreszenten DNA-<br />
Farbstoffs (z.B. Hoechst 33342) und/oder eines fluoreszenten Phalloidins deutlich<br />
verbessert werden. Da ein Teil der Embryonen in den hier zur Debatte stehenden<br />
Lebend-Präparaten durch mechanischen Druck aus der Eihülle befreit werden,<br />
könnten die verwendeten Farbstoffe das embryonale Gewebe erreichen. Hierbei<br />
muss aber noch getestet werden, ob die Diffusion der Moleküle in dem viskosen<br />
Einbettungsmedium (Voltalef-Öl) ausreichend ist. Alternativ könnten andere viskose<br />
Einbettungsmedien getestet werden, wobei sich eine 50 %ige Glycerolverdünnung<br />
bereits als weniger gut geeignet erwies, da diese häufiger zu Schäden des GFP-<br />
positiven Gewebes führte. Einen weiteren Hinweis auf initiierte Embryonalentwick-<br />
lung könnte der beginnende Abbau des Dotters liefern (Petavy, 1986), inwieweit dies<br />
aber ohne weitergehende Analysen feststellbar ist, bliebe zu testen. Gleiches gilt für<br />
die Analyse des im Hauptscreen zusätzlich zu Verfügung stehenden Fluoreszenz-<br />
markers innerhalb des Zentralnervensystems, der möglicherweise die Detektion<br />
differenzierten Gewebes erlaubt.<br />
Ein weiterer Punkt, der vor Beginn des Hauptscreens möglicherweise noch<br />
verbessert werden sollte, ist die Durchführung der Injektionen. Die fehlende Routine<br />
der Screener des Pilot-Screens, und die noch nicht perfektionierte Technik kommen<br />
in dem Befund zum Ausdruck, dass einige der als Negativ-Kontrollen durchgeführten<br />
Injektionen zur Letalität der injizierten Tiere führten (drei von zwölf im pupalen und<br />
sechs von sechzehn im larvalen Screen-Teil). Diese Kontroll-Injektionen wurden<br />
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