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II. 3. Diskussion
analysiert werden kann. Die in 2.1.1 und 4.2 beschriebenen Methoden erwiesen sich
hierbei als hinreichend und notwendig, um dieses Ziel zu erreichen. Dabei sind sie
sensitiv genug, um trotz des hohen Durchsatzes nicht zu viele interessante Phänoty-
pen zu verpassen. Im Rahmen des Pilot-Screens wurde nur eine der 30 Positiv-
Kontrollen übersehen, nämlich die Transformation der Antenne zu beinähnlichen
Strukturen nach spine-less-RNAi (Shippy et al., 2009; Toegel et al., 2009). Einige
andere subtile, teilweise noch subtilere Phänotypen sind aber im Laufe des Screens
erkannt worden, wie z.B. das Fehlen des distalen Teils der Antenne nach RNAi # 43,
Veränderungen des Kopf-Borstenmusters nach labial-RNAi (Posnien und Bucher,
2009) oder auch den adulten Phänotyp der spine-less-Transformation (Shippy et al.,
2009). Wenn man den möglicherweise aufgrund des Injektionszeitpunkts ausgeblie-
benen Ovarphänotyp nach pupaler piwi-Injektion (s. 2.2) mit einbezieht, ergibt sich
eine Falsch-Negativ-Rate von 6,6 %. Mit einem solchen Anteil falsch negativer
Ergebnisse muss gerechnet werden, er liegt in ähnlichen Bereichen oder sogar
besser als bei anderen RNAi-Screens (Fraser et al., 2000; Sönnichsen et al., 2005;
Neely et al., 2010; Schnorrer et al., 2010).
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Somit kann davon ausgegangen werden, dass die Analysen geeignet sind, um
Phänotypen mit hoher Sensitivität zu erkennen. Um aussagekräftige Daten über die
Sensitivität jedes einzelnen Auswertungsschrittes bezüglich bestimmter Gruppen von
Phänotypen zu erhalten, ist die Zahl der im Pilot-Screen bearbeiteten Injektionen
aber nicht ausreichend. Darüber wird der Hauptscreen Aufschluss geben. Insgesamt
kann festgehalten werden, dass alle Auswertungsschritte bereits während des Pilot-
Screens erfolgreich eingesetzt wurden und somit prinzipiell geeignet sind, um neue
Phänotypen zu detektieren.
So wurden nach pupaler Injektion sowohl in der ersten, als auch in der zweiten
Ablage Effekte der Injektionen festgestellt. Die Kutikula-Präparationen der ersten
Ablage führten zur Detektion der embryonalen Phänotypen in Abb. 35. Die Auswer-
tung der Lebendpräparate der zweiten Ablage ermöglichte die Detektion von drei
dsRNAs, die zum Tod der Embryonen noch vor der Sekretion von Kutikula führten,
und somit in den Kutikula-Präparaten der ersten Ablage nicht von unbefruchteten
Eiern unterschieden werden konnten (Abb. 31). Zudem konnten durch die Analyse
der Eimenge in der zweiten Ablage Defekte der Oogenese festgestellt werden (Abb.
33). Leider konnten in den Lebendpräparaten keine neuen, an der Muskelentwick-
lung beteiligten Gene gefunden werden. Die erfolgreiche Detektion des twist-