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3. Diskussion
II. 3. Diskussion
3.1. Ein genomweiter RNAi-Screen in Tribolium ist technisch
möglich
Im zweiten Kapitel dieser Arbeit habe ich bisher die Planung, Durchführung und
Auswertung eines Pilotscreens für ein genomweites Tribolium-RNAi-Screen Projekt
beschrieben. Diese Arbeiten stellen die Grundlage für die technische Durchführung
dieses Großprojekts und den Beweis seiner Machbarkeit dar. Im Folgenden möchte
ich zusammenfassen, inwieweit damit gezeigt werden konnte, dass sich die Methodik
technisch und bezüglich der zu erwartenden Ergebnisse zur Durchführung eines
genomweiten Projektes eignet, und mögliche kritische Punkte aufzeigen.
3.1.1. Sowohl pupale als auch larvale RNAi sind im Screenmaßstab
durchführbar
Im Rahmen des Pilot-Screens haben, wie auch für den Hauptscreen geplant,
zwei Screener jeweils Larven bzw. Puppen mit dsRNAs injiziert und die darauf fol-
genden Analysen durchgeführt. In beiden Fällen sind je vier Auswertungsschritte
nötig, um alle zu untersuchenden Prozesse abzudecken (Abb. 26). Dabei wird durch
die pupale Injektion auch in den Nachkommen der injizierten Tiere RNA-Interferenz
ausgelöst, was die Analyse der Embryonalentwicklung erlaubt (Bucher et al., 2002).
Durch die larvale Injektion soll der Einfluss der zu screenenden dsRNAs auf die
Metamorphose untersucht werden (Tomoyasu und Denell, 2004; Konopova und
Jindra, 2007). Die personelle Trennung beider Screen-Teile ermöglicht den Scree-
nern eine optimale Einarbeitung und die nötige Routine für die teilweise anspruchs-
vollen Arbeiten und Auswertungen. Die Screener müssen dabei einerseits in der
Lage sein, die Injektionen so effektiv wie möglich durchzuführen, und anderseits die
Morphologie der schlupfreifen Larven bzw. der Puppen und adulten Käfer genau
kennen und interessante Phänotypen sicher von natürlich auftretenden Defekten
unterscheiden können.
Um den iBeetle-Screen genomweit durchzuführen, müssen während der ersten
Phase des Projekts (drei Jahre) 6000 Gene analysiert werden. An jedem der beiden
Screening-Zentren (Göttingen und Erlangen) werden zwei Screener den larvalen und
zwei Screener den pupalen Teil des Screens durchführen. Dabei soll nur während
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