Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

II. 2. Ergebnisse
Abb. 29: Arbeitsplan 2 für larvale Injektionen und darauf folgende Auswertungen
Die Arbeitsschritte des zweiten Screeners des larvalen Screen-Teils sind in einem Wochenplan
dargestellt. Arbeitsschritte, die zu einem Durchgang des Screening-Ablaufs gehören
sind in der gleichen Farbe hervorgehoben. Die erwartete Bearbeitungszeit ist in Klammern
angegeben, der erste Durchgang (braun) weist zudem die Screen-Tage nach 2.1.1 aus.
Innerhalb eines sechswöchigen Blocks können acht Durchgänge ausgeführt werden. Arbeitschritte
vorheriger oder nachfolgender Blöcke sind in grau ergänzt. Um einen kontinuierlichen
Ablauf zu gewährleisten werden einige Arbeitsschritte des ersten Blocks noch nach
Beginn des darauf folgenden durchgeführt. Die Analyse der Stinkdrüsen (hellblau) aus
mehreren Durchgängen findet gesammelt statt. Die Schlupfkontrollen in den Woche 5, 6 und
7 könnten je nach persönlicher Preferenz an jeweils einem Tag durchgeführt werden, was
aber einen sehr langen Arbeitstag mit den jeweiligen folgenden Eizahl-Adult-Kontrollen nach
sich zöge.
d: Tag, h: Stunden.
2.2. Das Screening-Schema ermöglicht die Identifizierung
164
interessanter Phänotypen mit hoher Sensitivität
Für den Test des Screening-Ablaufs und den Nachweis über den Erfolg der Me-
thode wurden im Rahmen eines Pilotscreens insgesamt 112 dsRNAs injiziert. Die
Durchführung des Großteils der pupalen Injektionen und der darauf folgenden Aus-
wertungen hat Nikolaus Koniszewski (Universität Göttingen) unter meiner Anleitung
übernommen, die larvalen Injektionen und deren Auswertung hab ich selbst durchge-
führt. 82 der 112 dsRNAs wurden auf Grundlage von Fragmenten aus einer embryo-
nalen cDNA-Bank (zur Verfügung gestellt von R. Schröder; Wolff et al., 1995) herge-
stellt (s. 4.1). Die restlichen 30 dsRNAs waren gegen eine Auswahl Gene gerichtet,
deren Ausfallphänotyp bereits bekannt war (Tab. 8). Diese wurden als Positiv-
Kontrollen zufällig und für die Screener nicht erkennbar den Fragmenten unbekann-
ter Funktion hinzugefügt. Im Folgenden möchte ich die Ergebnisse dieses Pilot-
Screens darstellen.