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II. 2. Ergebnisse
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Im nächsten Schritt wurden die für die Injektionen und Analysen notwendigen
Methoden für die Durchführung im Großmaßstab getestet und angepasst. Dabei
wurde beispielsweise der Ablauf der Injektionen etabliert und verschiedene Präpara-
tionsmethoden für Kutikula- und Muskelpräparate zur Analyse der Embryonalent-
wicklung miteinander verglichen. Die Auswertung der adulten und pupalen Morpho-
logie wurden auf ihre Durchführbarkeit getestet. Hierbei mussten auch die zur Ver-
wendung kommenden Käferstämme auf ihre Eignung hin geprüft und die Auswer-
tungsschritte auf die Analyse der jeweiligen „Enhancer trap“-Expression ausgerichtet
werden. Von besonderer Wichtigkeit war außerdem die Bestimmung eines sinnvollen
zeitlichen Ablaufs und der nötigen und optimalen Inkubationszeiten.
Durch diese Tests und Vorversuche konnte ich ein detailliertes Protokoll zur
Durchführung der Injektionen und der nachfolgenden Auswertungsschritte erstellen
(siehe folgenden Text und 4.2). Es ermöglicht die Analyse aller zu untersuchenden
Prozesse mit zwei Injektionen pro Gen innerhalb weniger Wochen. Bei der Durchfüh-
rung des Pilot-Screens (2.2, 2.3) wurde dieses Protokoll getestet und erwies sich als
praktikabel und effizient.
Im Folgenden werden die einzelnen Arbeitsschritte des Screenablaufs vorge-
stellt, erläutert und auf wichtige Prinzipien des Screening-Ablaufs hingewiesen. Im
Anschluss daran werde ich die praktische Umsetzung dieses Protokolls im tatsächli-
chen Screening-Betrieb darlegen (2.1.2). Schließlich werden die Ergebnisse der
Durchführung des Pilotscreens, also dem Praxistest der Methodik, präsentiert (2.2
und 2.3).
Die vorgestellten Arbeitsschritte gelten für die Durchführung des Pilot- und des
Hauptscreens (sofern nicht anders angegeben) und sollen einen Überblick über den
Ablauf und die nötigen Arbeiten vermitteln. Eine Beschreibung der genauen methodi-
schen Durchführung findet sich im Abschnitt „Material und Methoden“ (4.2). Bei
jedem Arbeitsschritt werden Beobachtungen, Befunde und Ergebnisse protokolliert
und gegebenenfalls dokumentiert. Für die Auswertungen werden vor allem ein Prä-
parationsbinokular (für einige Arbeitsschritte mit Fluoreszenzlampe) und ein Fluores-
zenzmikroskop benötigt. Tiere die einen interessanten Phänotyp zeigen, werden
zumindest teilweise fixiert und archiviert. Im Rahmen des iBeetle-Screens wird die
Dokumentation direkt in eine Online-Datenbank (iBeetle-Base) eingetragen, die