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II. 1. Einleitung Serie zu beobachten. Dieses parallele Auftreten von starken und schwächeren Defekten kann die Detektion von zusätzlichen funktionellen Aspekten ermöglichen. 138 Ein großer Vorteil von RNAi-Screens ist schließlich der Aspekt der reversen Ge- netik. Das Gen, das einen interessanten Phänotyp verursacht, muss nicht aufwändig identifiziert, keine Mutation lokalisiert werden. Die Identität der injizierten bzw. ver- wendeten dsRNAs ist von vornherein bekannt, so dass das betroffene Gen unmittel- bar weiter untersucht werden kann. Durch die Synthese der benutzten dsRNAs auf Basis von Expressions- und genomischen Daten verliert auch die Unsicherheit über die Saturierung des Screens an Bedeutung. Während bei genetischen Screens wegen der Ungleichverteilung der induzierten Mutationen nur schwer eine definitive Aussage über die Saturierung gemacht werden kann (Pollock und Larkin, 2004), ist der begrenzende Faktor von RNAi-Screens vor allem die Qualität der Genomannota- tion. Ein RNAi-Screen in Tribolium bietet also beste Vorraussetzungen, um die Ein- schränkungen des Kandidaten-Gen-Ansatzes zu überwinden und Tribolium als Modellsystem voranzubringen.
1.4. iBeetle – ein genomweiter RNAi-Screen II. 1. Einleitung Wie im vorangegangenen Text bereits erläutert, steht die Forschung in Tribolium an einem Punkt, an dem die funktionelle Datenbasis aus Drosophila nicht mehr ausreicht, um Prozesse abschließend aufzuklären und neuen Fragestellungen nachzugehen. Um diese Einschränkung zu überwinden haben sich mehrere deutsche Tribolium-Labore unter der Leitung der Sprecher Gregor Bucher (Göttingen) und Martin Klingler (<strong>Erlangen</strong>) zusammengeschlossen, um einen genomweiten RNAi-Screen für entwicklungsrelevante Gene zu verwirklichen – den iBeetle-Screen. Das Konzept und die Ziele dieses Großprojekts, möchte ich im Folgenden kurz vorstellen. 1.4.1. Das iBeetle Konzept Im Rahmen des iBeetle-Screens sollen alle Tribolium-Gene durch RNAi auf ihre Funktion in unterschiedlichen Entwicklungsprozessen untersucht werden. Dabei verfolgt iBeetle drei übergeordnete Ziele: 1. Es soll eine Basis für funktionelle Studien in neuen Forschungsbereichen ge- schaffen werden. Für die Analyse von Prozessen, die in Drosophila nicht oder nur unzureichend bearbeitet wurden, sollen Kandidatengene gefunden werden. Dies trifft für Prozesse zu, die beispielsweise in Drosophila nicht untersucht werden können (z.B. die Entwicklung larvaler Beine, die Entwicklung von Stinkdrüsen) oder aufgrund technischer Schwierigkeiten nicht effektiv untersucht werden können (Metamorphose, Kopfentwicklung, die somatische Stammzellnische im Ovar). 2. Es sollen neue wichtige Entwicklungsgene gefunden werden, die entweder spezifisch für die Käferentwicklung sind, oder die in Drosophila ihre Funktion verloren haben, aus technischen Gründen bisher nicht untersucht werden konnten, oder eventuell sogar nicht mehr vorhanden sind. Solche Kandidaten- gene werden helfen, Fragen zu beantworten, die trotz intensiver Bearbeitung in Tribolium und Drosophila noch ungeklärt sind. Beispiele hierfür sind etwa fehlende Faktoren der antero-posterioren Achsendetermination oder die Seg- mentierungsmechanismen der posterioren Wachstumszone. 3. Tribolium soll als zweites Modellsystem für genomweite Studien der Insekten- biologie etabliert werden. Wenn iBeetle durchgeführt worden ist, können die dabei etablierten Prinzipien für andere Screens mit unterschiedlichen spezifi- 139
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Die Funktion von Genen der posterio
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Danke! Obwohl als letztes verfasst,
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Inhaltsverzeichnis 2.4.1. Die Segme
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Inhaltsverzeichnis 3.1.2. Die Auswe
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Zusammenfassung praktischen Durchf
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Abbildungsverzeichnis Abb. 24: Sche
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Abkürzungen Abkürzungen 8 AS: Ami
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Allgemeine Einleitung Allgemeine Ei
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Allgemeine Einleitung Tiere, hervor
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I. Kapitel: I. 1. Einleitung Die Fu
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I. 1. Einleitung 3; Davis und Patel
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I. 1. Einleitung 1.2. Drosophila me
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I. 1. Einleitung Butler, 1988). Int
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I. 1. Einleitung zur Phosphorylieru
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I. 1. Einleitung Gene ist in Tribol
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I. 1. Einleitung Die frühe Regulat
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I. 1. Einleitung wahrscheinlich üb
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I. 1. Einleitung wie in Vertebraten
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I. 1. Einleitung und Wharton, 1999)
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I. 1. Einleitung des nanos-Verlusts
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I. 1. Einleitung Außerdem zeigen n
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1.5. Ziele des ersten Kapitels der
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2. Ergebnisse I. 2. Ergebnisse 2.1.
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I. 2. Ergebnisse Abb. 6: Sequenzver
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I. 2. Ergebnisse Domäne vermittelt
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2.2.2. nanos-Expression ist nur in
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I. 2. Ergebnisse 2.3. pRNAi für na
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I. 2. Ergebnisse einerseits, dass d
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I. 2. Ergebnisse des Kopfes. Außer
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I. 2. Ergebnisse Doppel-RNAi in ver
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I. 2. Ergebnisse 2.4. Frühembryona
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I. 2. Ergebnisse nächst ist zu beo
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I. 2. Ergebnisse Domäne. Diese ble
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I. 2. Ergebnisse terminaler Zielgen
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I. 2. Ergebnisse Tatsächlich fehle
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I. 2. Ergebnisse Abb. 15: nos/pum-R
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I. 2. Ergebnisse Expression auf die
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I. 2. Ergebnisse 2.7. Die Beteiligu
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2.7.1. Tribolium brain-tumor I. 2.
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I. 2. Ergebnisse 2.7.3. brat-RNAi f
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I. 2. Ergebnisse kulas somit interm
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Abb. 19: brain-tumor-RNAi führt zu
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I. 2. Ergebnisse Keimbahn in Verbin
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Seite 133 und 134: 4.2.1. in situ Hybridisierung I. 4.
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II. 3. Diskussion nach den gleichen
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II. 3. Diskussion phänotypische Hi
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II. 3. Diskussion 3.2.6. iBeetle ha
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II. 4. Material und Methoden Phenol
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II. 4. Material und Methoden pigmen
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II. 4. Material und Methoden 214 Em
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II. 4. Material und Methoden bei de
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II. 4. Material und Methoden 218 Ti
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Allgemeine Diskussion Allgemeine Di
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Allgemeine Diskussion und Achsendet
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Anhang ACCCATCCGTACGGCTGCCGGGTCATTC
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Anhang 2. Ergänzende Ergebnisse zu
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Anhang 3. Zeitaufwand der iBeetle-A
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Anhang 5. Zusammenfassung der Ergeb
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234 134 900 14 similar to D123 (cdc
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236 77 1500 57 gene without homolog
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238 43 1000 99 similar to Rab-prote
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Anhang gemischt embryonal letal von
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Literatur Literatur Abdel-Latief, M
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Literatur Bernstein, D., Hook, B.,
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Literatur Ciglar, L. und Furlong, E
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Literatur Falciani, F., Hausdorf, B
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Literatur Gutjahr, T., Vanario-Alon
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Literatur Kiger, A. A., Baum, B., J
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Literatur Lin, H. und Spradling, A.
Seite 264 und 265:
Literatur binding protein that phys
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Literatur Riddiford, L. M., Hiruma,
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Literatur Schüpbach, T. und Wiesch
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Literatur Tomoyasu, Y., Miller, S.
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Literatur Zhang, X. D. und Heyse, J
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