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Zusammenfassung praktischen Durchführung des iBeetle-Screens vor, das die effiziente Analyse emb- ryonaler und postembryonaler Entwicklungsprozesse von der embryonalen Achsen- determination bis zur Entwicklung der Stinkdrüsen erlaubt. Um dieses zu testen, habe ich einen Pilot-Screen entworfen und durchgeführt, der demonstriert, dass durch diesen Ansatz wichtige Entwicklungsgene mit hoher Sensitivität und unbe- kannte Genfunktionen in hoher Zahl detektiert werden können. 4 Ich konnte also zeigen, dass ein genomweiter RNAi-Screen in Tribolium machbar ist und iBeetle ein ambitioniertes aber äußerst vielversprechendes Projekt und eine wichtige Grundlage für zukünftige, genorientierte Insektenforschung sein wird.
Abbildungsverzeichnis Abbildungsverzeichnis Abb. 1: Postembryonale Entwicklungsstadien von Tribolium castaneum..................14 Abb. 2: Unterschiedliche Enwicklungsmodi: Lang- und Kurzkeim.............................18 Abb. 3: Vereinfachtes Cladogramm ausgewählter Insektengruppen.........................18 Abb. 4: Von Gradienten zu Streifen: Die Ebenen der Drosophila-Segmentierungs- kaskade..............................................................................................................22 Abb. 5: Frühe Gradienten und Aktivitäten im Tribolium-Blastoderm..........................31 Abb. 6: Sequenzvergleich der funktionellen Domänen von NANOS- und PUMILIO- Proteinen unterschiedlicher Spezies..................................................................43 Abb. 7: Expression des Tribolium pumilio-Gens........................................................46 Abb. 8: nanos ist in allen getesteten Entwicklungsstadien exprimiert........................48 Abb. 9: Pupale RNAi gegen nanos und pumilio führt zu einer Reduktion larvaler Segmente...........................................................................................................51 Abb. 10: nanos- und pumilio-RNAi führen auch zu Kopfdefekten..............................54 Abb. 11: Verteilung der phänotypischen Klassen nach nanos- und pumilio-RNAi Experimenten.....................................................................................................55 Abb. 12: Verteilung der anterioren Defekte nach nanos/pumilio-RNAi......................56 Abb. 13: nos/pum-RNAi führt zu einem Zusammenbruch der Segmentbildung aus der Wachstumszone.................................................................................................60 Abb. 14: Die Expression von Markergenen zeigt Veränderungen posteriorer Blastodermbereiche ...........................................................................................64 Abb. 15: nos/pum-RNAi führt zu Veränderungen anteriorer Gewebe in embryonalen Stadien...............................................................................................................71 Abb. 16: OTD-1-Expression nach nanos/pumilio-RNAi .............................................74 Abb. 17: Sequenzvergleich von BRAT-Proteinen......................................................76 Abb. 18: Expression des Tribolium brain-tumor-Gens...............................................78 Abb. 19: brain-tumor-RNAi führt zu embryonalen Defekten ......................................83 Abb. 20: vasa-Expression verdeutlicht das Fehlen der PGCs nach nos/pum-RNAi..85 Abb. 21: pumilio-RNAi führt zu einer Eiablagehemmung ..........................................86 Abb. 22: pumilio spielt eine Rolle in der Extremitätenentwicklung.............................88 Abb. 23: Larvale pumilio-RNAi führt zu einem Entwicklungsblock kurz vor der pupalen Ecdysis.................................................................................................89 5
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Seite 41 und 42: I. 1. Einleitung und Wharton, 1999)
Seite 43 und 44: I. 1. Einleitung des nanos-Verlusts
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Seite 49 und 50: 2. Ergebnisse I. 2. Ergebnisse 2.1.
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Seite 55 und 56: 2.2.2. nanos-Expression ist nur in
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I. 2. Ergebnisse 2.7.3. brat-RNAi f
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Abb. 19: brain-tumor-RNAi führt zu
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3. Diskussion I. 3. Diskussion 3.1.
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I. 3. Diskussion leider nicht gepr
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I. 3. Diskussion Möglicherweise ve
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I. 3. Diskussion der antennalen Seg
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I. 3. Diskussion Effekt, der erst i
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I. 3. Diskussion Netzwerk, das zur
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I. 3. Diskussion gerufene Vernetzun
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I. 3. Diskussion Natürlich gibt es
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I. 3. Diskussion 3.4. Das Zusammens
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I. 3. Diskussion sion als Substrat
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I. 3. Diskussion ren gt-Domäne üb
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I. 3. Diskussion Außerdem hat otd-
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I. 3. Diskussion on eines von Fakto
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I. 3. Diskussion jeweiligen ersten
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4. Material und Methoden I. 4. Mate
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4.2.1. in situ Hybridisierung I. 4.
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I. 4. Material und Methoden ohne Bl
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II. 1. Einleitung Entwicklung. Dabe
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II. 1. Einleitung Serie zu beobacht
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II. 1. Einleitung 140 schen Fragest
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II. 1. Einleitung Augen und im zent
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II. 1. Einleitung 1.4.3. Die iBeetl
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II. 1. Einleitung sophila wegen tec
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II. 1. Einleitung 1.5. Ziele des zw
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II. 2. Ergebnisse nale Musterbildun
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II. 2. Ergebnisse 152 Im nächsten
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II. 2. Ergebnisse bei 30°C inkubie
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II. 2. Ergebnisse 1999a) 156 Auch d
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II. 2. Ergebnisse lichst effektiv z
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II. 2. Ergebnisse 160
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II. 2. Ergebnisse Abb. 29: Arbeitsp
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II. 2. Ergebnisse Ergebnisse der Po
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II. 2. Ergebnisse von RNAi-Effekten
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II. 2. Ergebnisse 2.3. Es konnten f
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II. 2. Ergebnisse Abb. 32: Zusammen
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II. 2. Ergebnisse Abb. 33: Defekte
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II. 2. Ergebnisse zu trennen. So k
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II. 2. Ergebnisse Abb. 35: Morpholo
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II. 2. Ergebnisse Abb. 38: Bisher u
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Allgemeine Diskussion Allgemeine Di
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234 134 900 14 similar to D123 (cdc
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238 43 1000 99 similar to Rab-prote
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Anhang gemischt embryonal letal von
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Literatur Literatur Abdel-Latief, M
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Literatur Bernstein, D., Hook, B.,
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Literatur Ciglar, L. und Furlong, E
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Literatur Falciani, F., Hausdorf, B
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Literatur Gutjahr, T., Vanario-Alon
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Literatur Kiger, A. A., Baum, B., J
Seite 262 und 263:
Literatur Lin, H. und Spradling, A.
Seite 264 und 265:
Literatur binding protein that phys
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Literatur Riddiford, L. M., Hiruma,
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Literatur Schüpbach, T. und Wiesch
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Literatur Tomoyasu, Y., Miller, S.
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Literatur Zhang, X. D. und Heyse, J
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