Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

I. 3. Diskussion
gerufene Vernetzung der Proteine und RNA wieder zu lösen. Eine übermäßige
Vernetzung könnte aber irreversibel sein (Masuda et al., 1999; Orlando, 2000).
Wie schon in 2.2.2 erwähnt, ist es die wahrscheinlichste Erklärung, dass die na-
nos Expressionstärke die Sensitivität der in-situ-Hybridisierung unterschreitet und so
der Nachweis verhindert wird. Die RT-PCR Experimente zeigen, dass das nanos-
Gen exprimiert und gespleißt wird (s. 2.2.2), lassen aber keine definitive Aussage
über die Expressionsstärke zu. Tribolium-nanos-Expression konnte auch durch Real-
time-PCR-Experimente nachgewiesen werden, wobei ein vergleichsweise niedriges
Expressionslevel festgestellt wurde (Dr. Joel Savard, persönliche Mitteilung). Diese
PCR-Methoden gelten, zumindest in anderen Systemen (Biedermann et al., 2004),
als sensitiver im Vergleich zu colorimetrischer ISH. Eine Erklärung für ein niedriges
nanos Expressionsniveau könnte das Fehlen von Polzellen und eines ausgeprägten
Polplasmas in Tribolium bieten (Grünfelder, 1998). In Drosophila ist die nanos-mRNA
zunächst auf das Polplasma und dann auf die Polzellen begrenzt (Wang und Leh-
mann, 1991; Gavis und Lehmann, 1992). Ohne die Bildung eines Polplasmas unter-
bleibt möglicherweise eine ausgeprägte Konzentrierung der für die primordialen
Keimzellen nötigen Faktoren, was zu einer breiteren Verteilung der RNAs und niedri-
gerer lokaler Konzentration führen könnte. Wenn man also von einer zu Drosophila
konservierten posterioren Lokalisierung von nanos ausgeht, würde in einer Spezies
ohne Polzellen auch eine weniger ausgeprägte Lokalisierung ausreichen, was die
Detektion erschweren könnte. Die Ausbildung eines Gradienten ist natürlich auch
von einer mRNA die sich innerhalb eines etwas größeren Bereichs des posterioren
Embryos befindet möglich, ähnlich wie bei bcd am anterioren Pol von Drosophila-
Embryonen (Berleth et al., 1988; St Johnston et al., 1989).
In Zukunft können möglicherweise sensitivere Detektionsmethoden wie z.B. in-
situ-RT-PCR (Abdel-Latief, 2007; Abdel-Latief et al., 2008), Reportergenkonstrukte
oder Antikörper gegen das vollständige NANOS-Protein helfen, diese Lücke zu
schließen.
nanos-mRNA könnte lokalisiert sein
Im Folgenden möchte ich die Möglichkeiten einer lokalisierten nanos-Aktivität be-
sprechen, die es erlauben würden dem nanos/pumilio-Komplex räumliche Spezifität
zu vermitteln.
Die beschriebenen anterioren und posterioren Defekte erfordern nanos Aktivität
an unterschiedlichen Orten des Tribolium-Embryos. Das Auftreten der posterioren
107