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I. 3. Diskussion
Nachweis eines möglicherweise in geringen Konzentrationen vorliegenden Proteins
verhindert wurde.
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Tribolium-nanos ist anhand seiner charakteristischen Zink-Finger-Domäne (Curtis
et al., 1997) zweifelsfrei als nanos-Ortholog zu identifizieren. Diese Domäne ist durch
die invarianten, ungewöhnlichen Abstände der funktionellen Aminosäuren unver-
wechselbar (Curtis et al., 1997). Dies zeigt zwar, dass es sich bei dem hier unter-
suchten Gen um ein nanos-Ortholog handelt, nicht aber, dass es das einzige im
Tribolium Genom ist. Das Vorhandensein eines weiteren nanos-Homologs würde die
Möglichkeit eröffnen, dass es sich bei dem hier beschriebenen nanos-Gen um ein
inaktiviertes, Pseudogen-ähnliches Paralog handelt (D'Errico et al., 2004). Dessen
mRNA würde dann zwar noch produziert werden, was den Nachweis durch RT-PCR
ermöglichen würde, müsste dann aber schnell degradieren, so dass der in situ
Nachweis verhindert würde. Diese Erklärung ist möglich, scheint aber unwahrschein-
lich. Naszierende RNAs können auch mit Standard-Methoden im Kern nachgewiesen
werden (z.B. knirps, nicht gezeigt), so dass also die Degradierung der reifen mRNA
alleine den mangelnden in situ Nachweis nicht erklären kann. Außerdem konnten im
Tribolium Genom keine weiteren Sequenzen identifiziert werden, deren putative
Proteinsequenzen zumindest Ähnlichkeiten zu Teilen der bekannten NANOS-
Proteine aufweisen. Innerhalb des sequenzierten Genoms gibt es also kein weiteres
nanos-Homolog. Die Möglichkeit, dass ein solches in den unsequenzierten Berei-
chen des Tribolium Genoms liegt, ist nicht auszuschließen aber gering, da diese
Bereiche zum größten Teil aus repetitiven Sequenzen bestehen (Tribolium Genome
Sequencing Consortium, 2008). Die durch nanos-RNAi hervorgerufenen Phänotypen
und deren Ähnlichkeit zu den pum-RNAi-Effekten schließlich, zeigen deutlich, dass
das hier untersuchte nanos in Tribolium ein aktives, funktionelles Gen darstellt.
Möglicherweise ist die vorhandene nanos-mRNA in situ nicht für eine Hybridisie-
rung zugänglich. In Drosophila wird nanos-mRNA lokalisiert und streng translationell
reguliert, woran mehrere RNA-bindende Proteine beteiligt sind (Wharton und Struhl,
1989; Bergsten und Gavis, 1999; Bergsten et al., 2001; Zaessinger et al., 2006; Jain
und Gavis, 2008). Die bisher bekannte Tribolium-nanos-RNA ist deutlich kürzer als
die Drosphila-mRNA (1081 vs. 2347 Nukleotide), so dass vorhandene Proteine die
Hybridisierung stärker beeinflussen könnten. Allerdings sollten Dauer und Tempera-
tur der Hybridisierung in der Regel ausreichen, um eine durch Formaldehyd hervor-