Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

I. 3. Diskussion
Netzwerk, das zur Regionalisierung des Tribolium-Blastoderms führt zu entschlüs-
seln.
3.3. Wo wirken nanos und pumilio?
Die beschriebenen, distinkten RNAi-Phänotypen legen nahe, dass nanos und
pumilio im Tribolium-Embryo spezifische Aufgaben für die Musterbildung erfüllen,
und eher keine allgemeinen Funktionen, beispielsweise beim Abbau von mRNAs
oder der Zellzykluskontrolle wahrnehmen. So stellt sich die Frage, wie die Funktion
von nanos und pumilio auf bestimmte Bereiche des Embryos beschränkt wird. In
Drosophila wird die Funktion des nanos/pumilio-Komplexes über die Lokalisierung
der nos-mRNA am posterioren Pol des Embryos räumlich begrenzt (Wang und
Lehmann, 1991). In Tribolium, wie in Drosophila, ist die maternale pumilio-mRNA
ubiquitär verteilt, so dass auch hier nanos die räumliche Spezifität vermitteln sollte.
Wie in 2.2.2 beschrieben war es allerdings nicht möglich, nanos-mRNA- oder Prote-
inexpression in situ zu detektieren, obwohl die mRNA durch RT-PCR über alle Ent-
wicklungsstadien nachweisbar war, und die RNAi-Phänotypen deutlich die Aktivität
des Tribolium-nanos-Gens belegen.
Die whole-mount in-situ-Hybridisierung an Tribolium-Embryonen ist eine gut etab-
lierte Methode (z.B. Sommer und Tautz, 1993; Brown et al., 1994a) und wird auch in
Erlangen seit Jahren erfolgreich angewandt. Somit ist es unwahrscheinlich, dass rein
technische Schwierigkeiten den Grund für das Fehlen des Nachweises in situ dar-
stellen. Trotzdem wurde versucht durch unterschiedliche Färbemethoden die Sensiti-
vität zu erhöhen sowie die Permeabilität der Gewebe und die Länge und Sequenz
der Sonden zu variieren (s. 4.2.1). Der Vergleich mit durchgeführten Positivkontrollen
und die Erfahrung mit in-situ-Hybridisierungen anderer Tribolium-Gene, wie sie
mehrfach auch in dieser Arbeit gezeigt werden, macht deutlich, dass Sonden, Emb-
ryonen und Fehler in der Methode als Grund für den fehlenden Nachweis ausge-
schlossen werden können. Der erfolglose Einsatz von polyklonalen Antiseren gegen
zwei synthetisch hergestellte Peptide des NANOS-Proteins (Eurogentech, Köln,
Deutschland/Seraing, Belgien; s. 4.2.2) könnte dagegen auf rein technische Schwie-
rigkeiten zurückzuführen sein. Obwohl die Auswahl der Peptide von Fachleuten der
Firma Eurogentec getroffen wurde, ist es durchaus möglich, dass diese Epitope im
nativen bzw. fixierten Protein nicht ausreichend zugänglich waren und somit der
105