Experimentelle Mikrobiologie und Genetik - ISB - Bayern
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52 Kommentierte Versuchsanleitungen <strong>und</strong> Kopiervorlagen<br />
3.5.16<br />
<strong>Experimentelle</strong> <strong>Mikrobiologie</strong> <strong>und</strong> <strong>Genetik</strong><br />
Nutzung von Enzymen: ß-Galactosidase<br />
Material: Bechergläser (50 ml, 100 ml), Messzylinder (10 ml), Glasstab, Stoppuhr<br />
Chemikalien: Immobilisat <strong>und</strong> Gelierbad von ß-Galactosidase in Calciumalginat aus<br />
Versuch „Immobilisierung von ß-Galactosidase“, ß-Galactosidase-<br />
Kapseln („Enzym Lactase für eine ges<strong>und</strong>e Ernährung“, z. B. Firma Pro<br />
Natura, Apotheke), Lactose-Monohydrat-Lösung (ρ* = 52,6 g/l), Glucose-<br />
Teststäbchen für halbquantitative Nachweise (Apotheke) 17<br />
Durchführung<br />
1: • 3 50-ml-Bechergläser werden mit 10 ml Lactose-Lsg. gefüllt.<br />
• In die drei Lösungen wird jeweils ein Glucose-Teststäbchen getaucht,<br />
die Glucose-Konzentration festgestellt <strong>und</strong> in die Beobachtungstabelle<br />
eingetragen (t=0).<br />
2: • Das erste Becherglas wird unverändert gelassen (negative Kontrolle).<br />
3:<br />
• Im zweiten Becherglas wird die enzymatische Aktivität von freier (=<br />
nicht immobilisierter) ß-Galactosidase untersucht (positive Kontrolle):<br />
In das zweite Becherglas wird möglichst quantitativ der Inhalt einer ß-<br />
Galactosidase-Kapsel gegeben, die Stoppuhr wird in Gang gesetzt,<br />
<strong>und</strong> die Mischung gründlich mit einem Glasstab verrührt, bis die ß-<br />
Galactosidase-Partikel gleichmäßig verteilt sind.<br />
• Nach 5 <strong>und</strong> 10 Minuten wird der Glucose-Gehalt der beiden Bechergläser<br />
jeweils mit einem Teststäbchen untersucht <strong>und</strong> entsprechend<br />
der Gebrauchsanweisung durch Farbvergleich mit der Skala auf dem<br />
Teststreifen-Behälter ausgewertet.<br />
• Im dritten Becherglas wird die enzymatische Aktivität von immobilisierter<br />
ß-Galactosidase untersucht (Testansatz):<br />
Dazu werden die Calcium-Alginat-Immobilisat-Kugeln aus dem Immobilisierungsversuch<br />
zu dem dritten Becherglas gegeben.<br />
• Wieder wird jeweils nach Reaktionszeiten von 5 <strong>und</strong> 10 Minuten auf<br />
die oben beschriebene Weise der Glucose-Gehalt des Gemisches mit<br />
einem Teststäbchen überprüft.<br />
Beobachtung: beispielhafte Ergebnisse:<br />
ρ*(Glucose)<br />
(mg/100 ml)<br />
Lactose-Lsg<br />
t (min)<br />
0<br />
5<br />
10<br />
ohne Enzym mit freiem Enzym mit immobil. Enzym<br />
Deutung:<br />
Erklärung:<br />
17 Es ist das Produkt angegeben, mit dem die Experimente durchgeführt wurden. Die Verwendung von Alternativ-Produkten<br />
ist denkbar, aber nicht erprobt.<br />
S
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