Experimentelle Mikrobiologie und Genetik - ISB - Bayern

50 Kommentierte Versuchsanleitungen und Kopiervorlagen
3.5.16
Experimentelle Mikrobiologie und Genetik
Nutzung von Enzymen: ß-Galactosidase
Zeitbedarf: Vorbereitung: Versuch Immobilisierung von ß-Galactosidase;
die eigentliche Durchführung ca. 45 Minuten, Teilversuche möglich
Ziel: Erkennen, dass bei der Spaltung des Disaccharids Lactose durch das
Enzym ß-Galactosidase Glucose gebildet wird
Material: Bechergläser (50 ml, 100 ml), Messzylinder (10 ml), Glasstab, Stoppuhr
Chemikalien: Immobilisat und Gelierbad von ß-Galactosidase in Calciumalginat aus
Versuch „Immobilisierung von ß-Galactosidase“, ß-Galactosidase-
Kapseln („Enzym Lactase für eine gesunde Ernährung“, z. B. Firma Pro
Natura, Apotheke), Lactose-Monohydrat-Lösung (ρ* = 52,6 g/l), Glucose-
Teststäbchen für halbquantitative Nachweise (Apotheke) 16
Durchführung:
1: • 3 50-ml-Bechergläser werden mit 10 ml Lactose-Lsg. gefüllt.
• In die drei Lösungen wird jeweils ein Glucose-Teststäbchen getaucht,
die Glucose-Konzentration festgestellt und in die Beobachtungstabelle
eingetragen (t = 0).
2: • Das erste Becherglas wird unverändert gelassen (negative Kontrolle).
• Im zweiten Becherglas wird die enzymatische Aktivität von freier
(= nicht immobilisierter) ß-Galactosidase untersucht (positive Kontrolle):
In das zweite Becherglas wird möglichst quantitativ der Inhalt einer ß-
Galactosidase-Kapsel gegeben, die Stoppuhr wird in Gang gesetzt und
die Mischung gründlich mit einem Glasstab verrührt, bis die ß-
Galactosidase-Partikel gleichmäßig verteilt sind.
• Nach 5 und 10 Minuten wird der Glucose-Gehalt der beiden Bechergläser
jeweils mit einem Teststäbchen untersucht und entsprechend
der Gebrauchsanweisung durch Farbvergleich mit der Skala auf dem
Teststreifen-Behälter ausgewertet.
3: • Im dritten Becherglas wird die enzymatische Aktivität von immobilisierter
ß-Galactosidase untersucht (Testansatz):
Dazu werden die Calcium-Alginat-Immobilisat-Kugeln aus dem Immobilisierungsversuch
zu dem dritten Becherglas gegeben.
• Wieder wird jeweils nach Reaktionszeiten von 5 und 10 Minuten auf
die oben beschriebene Weise der Glucose-Gehalt des Gemisches mit
einem Teststäbchen überprüft.
16 Es ist das Produkt angegeben, mit dem die Experimente durchgeführt wurden. Die Verwendung von Alternativ-Produkten
ist denkbar, aber nicht erprobt.
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