Experimentelle Mikrobiologie und Genetik - ISB - Bayern

3.5.10
Kommentierte Versuchsanleitungen und Kopiervorlagen 45
Experimentelle Mikrobiologie und Genetik
Hydrolyse von DNA und RNA, Nachweis der
unterschiedlichen Zuckerbausteine
Vorbereitung: Hydrolyse der Nukleinsäuren
Material: Waage, Spatel, Reagenzgläser, Reagenzglasständer, Becherglas
(250 ml, hohe Form), Messpipetten (10 ml), Pipettierhilfen, Stoppuhr
Chemikalien: DNA (aus Lachssperma), RNA (aus Torilis spec.), Schwefelsäure
(c = 1 mol/l)
Durchführung: • Jeweils 3 mg DNA bzw. RNA werden mit 10 ml Schwefelsäure versetzt.
• Die Lösungen werden für 10 min in ein siedendes Wasserbad (Becherglas
auf der Heizplatte) gestellt.
• Die Hydrolysate werden für die Folgeversuche bei 4 °C aufbewahrt.
Versuch: Nachweis der unterschiedlichen Zuckerbausteine
Material: Waage, Spatel, Reagenzgläser, Reagenzglasständer, Messkolben
(100 ml), Messpipetten (0,1 ml, 1 ml, 5 ml), Magnetrührer mit Heizplatte,
Pipettierhilfen, Stoppuhr
Chemikalien: Diphenylamin, konz. Schwefelsäure, Essigsäure, Orcin (1,3-Dihydroxy-5methylbenzol),
Eisen(III)-chlorid, konz. Salzsäure, DNA-Hydrolysat, RNA-
Hydrolysat, Ribose-Lsg. (30 mg/100 ml), Desoxyribose (30 mg/100 ml),
dest. Wasser
Vorbereitung
(durch die Lehrkraft):
• Herstellung des Dische-Reagenz zum Nachweis der Desoxyribose
(Achtung: Schutzbrille, Arbeit unter dem Abzug):
1 g Diphenylamin wird in 2,5 ml konz. Schwefelsäure gelöst und mit
Essigsäure auf 100 ml aufgefüllt (im Dunkeln 1 Woche haltbar).
• Herstellung des Orcin-Reagenz zum Nachweis der Ribose (Achtung:
Schutzbrille, Arbeit unter dem Abzug):
0,2 g Orcin und 0,1 g Fe(III)-chlorid werden in 100 ml konz. Salzsäure
gelöst (im Dunkeln 1 Woche haltbar).
Durchführung: • Desoxyribose-Nachweis:
Jeweils 1 ml DNA- bzw. RNA-Hydrolysat, Ribose-, Desoxyribose-Lsg.
und Wasser werden mit 2 ml Dische-Reagenz versetzt und 5 min im
siedenden Wasserbad erhitzt.
• Ribose-Nachweis:
Jeweils 0,1 ml DNA- bzw. RNA-Hydrolysat, Ribose-, Desoxyribose-
Lsg. und Wasser werden mit 1 ml Orcin-Reagenz versetzt und 2 min
im siedenden Wasserbad erhitzt.
Beobachtung: Farbe der Lösungen:
Deutung:
Edukt DNA-
Hydrolysat
Dische-R.
Orcin-R.
RNA-
Hydrolysat
Desoxyribose
S
Ribose Wasser