Experimentelle Mikrobiologie und Genetik - ISB - Bayern

3.3.2 Proteine als Baustoffe
Anleitungen zu den Experimenten 25
Kollagen als Bestandteil des Knochens: Knochenentkalkung
• Schweine- oder Kalbsrippen sauber auslösen.
• Knochen abwiegen und Gewicht festhalten.
• Knochen 1 Woche lang in einer feuchten Kammer in 10%iger Salzsäure einlegen.
• Knochen mit Wasser abspülen, trocknen und erneut wiegen; Gewichtverlust festhalten.
• Entstandene Knorpelmasse 5 min in Wasser kochen. Mit dem entstandenen Knochenleim
eine Klebeprobe mit Papier machen.
3.3.3 Isolation von DNA (auch Jgst. 11)
A) DNA aus Bananen (veränd. nach Lucius, E. R. et al (1998));
http://www.ipn.uni-kiel.de/eibe/UNIT01DE.PDF, online 05.03.2010)
Geräte: Becherglas (250 ml), Waage, Küchenmesser, Schneidebrettchen, Mörser und Pistill,
Glasstäbe, Wasserbad mit Thermometer, Eisbad, Messzylinder (25 ml, 100 ml), Sieb, Trichter,
Kaffeefilter, Erlenmeyerkolben (100 ml), Messpipetten (1 ml, 10 ml), Pipettierhilfen, Holzstäbchen,
Kühlschrank, Handschuhe
Chemikalien: Wasser, Spülmittel, Kochsalz, Eis, flüssiges Feinwaschmittel (alternativ: Lösung
von Waschmittelenzymen, z. B. Biozym SE), Propan-2-ol (Isopropanol)
Pflanzenmaterial: Bananen
Vorbereitung (durch die Lehrkraft):
• Kühlung von Propan-2-ol, Messzylinder (25 ml), Messpipetten (10 ml) und Glasstäben im
Eisfach
• Vorheizen des Wasserbades auf 65°C
Durchführung:
• 10 ml Spülmittel werden in einem Messzylinder mit Wasser auf 100 ml aufgefüllt.
• Die Spülmittellösung wird in ein Becherglas überführt und mit 3 g Kochsalz versetzt (Lysis-Puffer).
• Ein Viertel einer Banane wird klein geschnitten und mit 20 ml des Lysis-Puffers für 1 min
in einem Mörser mit dem Pistill zerrieben.
• Die zerquetschte Banane wird dann in das Becherglas mit dem restlichen Puffer zurückgegeben
und mit dem Glasstab gut durchgerührt.
• Das Becherglas mit dem Gemisch wird für 5 min in ein 65 °C heißes Wasserbad gestellt
und anschließend für 5 min in einem Eisbad gekühlt.
• Nun wird das Gemisch vorsichtig durch das Küchensieb in den Trichter mit dem Kaffeefilter
abgegossen. Es werden ca. 25 ml in den Erlenmeyerkolben filtriert. Der Filter verstopft
recht schnell; dann Filter wechseln.
• Zum Filtrat werden 3 ml Feinwaschmittel (alternativ: 1 ml Enzymlösung) pipettiert. Das
Gemisch wird dann 3 min lang geschwenkt.
• 10 ml diese Gemisches werden in einen gekühlten Messzylinder abgefüllt und mit einer
gekühlten 10 ml-Messpipette mit 10 ml eisgekühltem Propan-2-ol überschichtet. Mit einem
gekühlten Glasstab wird vorsichtig an der Grenzschicht gerührt. Die DNA kann dann langsam
auf den Stab aufgewickelt und herausgenommen werden.