Experimentelle Mikrobiologie und Genetik - ISB - Bayern

Arbeitstechniken 19
Hinweise zur Sterilisation von Kulturmedien im Autoklav (in der Schule meist Dampfdrucktopf)
• Gefäße maximal zur Hälfte füllen, möglichst weniger. Je voller die Gefäße sind, desto
leichter läuft das Medium beim Druckabsenken über.
• Medium mit festem, fadenförmigem Agar vor dem Sterilisieren evtl. aufkochen, um eine
gleichmäßige Verteilung des Agars zu erreichen. Anderenfalls besteht die Möglichkeit,
dass auf dem Boden der Gefäße durch den dort angesammelten Agar die Viskosität des
Mediums so hoch ist, dass Konvektionsströmungen und damit eine gleichmäßige Wärmeverteilung
verhindert werden. In diesem Bereich würde das Medium dann nicht ausreichend
erhitzt und damit nicht sterilisiert.
• Verschlüsse von Kulturmediumflaschen lose auflegen, um ein Verdrängen der Luft durch
Wasserdampf zu ermöglichen und ein Platzen der Flaschen beim Erhitzen oder Abkühlen
zu verhindern. Wird Sterilisationsgut in mehreren Ebenen eingebracht, Watte- und Zellstoffstopfen
der unteren Ebene durch Abdecken mit Aluminiumfolie vor herabtropfendem
Kondenswasser schützen.
• Beschriftung des Sterilisationsgutes in „autoklavenfester“ Form vornehmen, z. B. durch an
den Gefäßen angebrachte Papierzettel (viele „wasserfeste“ Tuschen von Faser- und Filzschreibern
sind nicht „autoklavenfest“!).
• Um sicherzustellen, dass auch das Innere des Sterilisationsgutes während der gesamten
Sterilisationszeit eine Temperatur von 121 °C erreicht, muss der eigentlichen Sterilisationszeit
(15 min bei 121 °C, 1,00 bar) eine Aufheizzeit hinzu gerechnet werden.
• Eine Übersicht über die Aufheizzeiten gibt folgende Tabelle:
Einzelvolumina Aufheizzeit von etwa
bis 50 ml 5 min
50 bis 100 ml 8 min
100 bis 500 ml 12 min
500 bis 1000 ml 20 min
• Möglichst nur Volumina gleicher Größenordnung in den Autoklaven einbringen. Die Dauer
des Erhitzens richtet sich nach dem jeweils größten Volumen, weil die eigentliche Sterilisationszeit
erst an dem Zeitpunkt beginnt, an dem alle Teile in dieser Portion die angegebene
Temperatur erreicht haben. Dadurch werden kleinere Volumina einer unnötigen Hitzebelastung
ausgesetzt.
• Nach Ablauf der Sterilisationszeit Druck langsam ablassen (Dampfdrucktopf erst bei abgesenktem
Druck öffnen) und für ausreichende Abkühlung der Flüssigkeit sorgen, sonst
beginnt sie zu sieden, wobei die Verschlüsse nass oder gar vom Gefäß geschleudert
werden, besonders durch plötzlich einsetzendes Sieden beim Siedeverzug.
Sterilisation von Pipetten, leeren Gefäßen u. ä. im Autoklav
Pipetten, leere Gefäße, Tücher etc. werden wie Kulturmedien (15 min, 121 °C, 1,00 bar) sterilisiert.
Nach der Sterilisation kann der Dampf schnell abgelassen werden, weil keine Flüssigkeiten
heraussieden können. Bei großen oder kompliziert verschmolzenen Glasgefäßen
muss jedoch langsam abgekühlt werden, um ein Springen zu vermeiden.
Es empfiehlt sich, die Restfeuchtigkeit durch eine Nachtrocknung zu entfernen. Dies kann
auf zweierlei Weisen geschehen:
(1) In trockener Heißluft bis etwa 100 °C (z. B. Sterilisationsschrank).
(2) Einige Autoklaven besitzen eine Einrichtung, mit der nach der Sterilisation im Sterilisationsraum
ein Vakuum erzeugt werden kann. Darin werden die Feuchtigkeitsreste durch
Verdampfen entfernt.
Eine Alternative stellt die trockene Sterilisation im Heizschrank, 3 Stunden bei 135 °C dar.