Bestimmung des Paracetamolgehalts in Vivimed - Adolf-Reichwein ...

Bestimmung des
Paracetamolgehalts in Vivimed
von
Natalie Rotermel und
Katharina Juhasz-Dora

Inhalt
1. Allgemeine Information zu den Chemikalien
und den Bestandteilen einer Vivimed Tablette
(Name, Wirkungsweise, Struktur etc.)
2. Versuchsdurchführung
3. Beobachtung und Probleme (Fehlerquellen)
4. Endergebnis

Coffein
• Summenformel: C8H10N4O2
• Molmasse: 194,19 g/mol
• R-/S-Sätze: R: 22 S: (2)
• Andere Namen: 1,3,7-Trimethylxanthin,
1,3,7-Trimethyl-2,6-purindion
• farblose, geruchlose, bitter schmeckende Kristalle

Der Wirkstoff Paracetamol
• Summenformel: C8H9NO2
• Molmasse: 151,17 g/mol
• Löslichkeit in H2O: 14 g/L
• R-/S-Sätze: R 22-52/53 S 22-61
• Andere Namen von Paracetamol:
4-Hydroxyacetanilid, Acetaminophen,
N-Acetyl-p-Aminophenol,
N-(4-Hydroxyphenyl) acetamid
• weißer, feinkristalliner Feststoff
• Der Name leitet sich vom strukturellen Namen ab:
para-(Acetylamino)phenol

Die Wirkung von Paracetamol
• Genutzt wird es in verschiedenen Medikamenten,
etwa Erkältungsmitteln, sowie als Hauptbestandteil
vieler Schmerzmittel und Teil von Kombipräparaten.
• schmerzstillende und fiebersenkende Wirkung
• der analgetische Effekt kommt hauptsächlich im
Gehirn und Rückenmark zustande

Schmerzwahrnehmung/Prostaglandine

• Paracetamol greift im zentralen Nervensystem und
nicht in der Peripherie des Körpers an
• Die Hauptwirkung scheint in einer Hemmung der
Cyclooxygenase-3 im Rückenmark zu bestehen.
• Dieses Enzym ist für die Bildung von Prostaglandinen
verantwortlich, die wiederum an der
Schmerzweiterleitung ins Gehirn beteiligt sind.
• Andere Wirkungen betreffen die Serotonin-
Rezeptoren (Typ 5-HT3) im Rückenmark, über diesen
Rezeptortyp kann das Nervensystem die
Weiterleitung von Schmerz hemmen.

Nebenwirkung
• Nebenwirkungen: Übelkeit, Hautrötung/-ausschlag,
Schweißausbrüche und Blutdruckabfälle
• Extrem seltene Nebenwirkungen: Störungen der
Blutbildung oder Verkrampfung der Atemmuskulatur.
• Aufgrund der einfachen Beschaffung kommt es
jedoch nicht selten zu Überdosierungen
• Ab eine Menge von 7-10g pro Tag wirkt
Paracetamol Leber toxisch
(Zersetzung der Leber).

Eine schwere Paracetamolvergiftungen
verläuft in 3 Phasen:
1. Phase, innerhalb der ersten Stunde: Übelkeit,
Erbrechen, Schwitzen.
2. Phase, 24–48 Stunden nach Giftaufnahme: Bei
kurzfristiger Besserung des Allgemeinbefindens,
Beginn der Leber- und evtl. auch der
Nierenschädigung.
3. Phase, 3–5 Tage nach der Giftaufnahme: Akutes
Leberversagen (Leberzerfallskoma) mit
Unterleibschmerzen, Gelbsucht, Blutungen,
Bewußtseinseintrübungen, Koma

Methoden der Entgiftung:
• Giftentfernung: provoziertes Erbrechen
ansonsten Magenspülung
• Hemmung der Resorption: Aktivkohle
• Neutralisierung der Giftwirkung: Antidot
Acetylcystein (in der Klinik!)

Versuchsdurchführung
Bestimmung des Paracetamolgehalts mittels HPLC
• Eluent = Methanol: 0,1% Phosphorsäure
• Flussrate: 1 mL/min
• Detektor: UV, 240nm
• RP-Säule: C8-Säule
Säule Länge: 125mm
Innendurchmesser: 4mm
(SiO2)n 8 C-Atome

Versuchsdurchführung
1. Ansetzen der Stammlösung:
• 2,5001 g Paracetamol wird in einem Wägeschiffchen
eingewogen
• Diese Masse wurde in den 250 ml Messkolben
überführt und mit dest. Wasser aufgefüllt
β(Stammlösung)=0,01 g/ml = 10 mg/ml = 0,00001
g/µl= 0,01 mg/µl
• Da die Probe, die auf die Säule geht maximal 1 nmol
der Substanz enthalten darf, müssen wir die
Verdünnung so variieren, dass die Stoffmenge der
Standards unter 1 nmol liegt

2. Ansetzen der Kalibrierlösungen:
• mit einer Eppendorf-Pipette wurde 25 µl, 30 µl, 35
µl und 40 µl der Stammlösung abpipettiert, in einen
100 ml Messkolben überführt und mit dest. Wasser
aufgefüllt
• So erhält jede Kalibrierlösung eine bestimmte
Massenkonzentration β:
β (1. Kalibrierlsg.)= 0,25 mg/ 100ml= 0,0025 mg/ml
β (2. Kalibrierlösg.)= 0,3 mg/ 100ml= 0,003 mg/ml
β (3. Kalibrierlösg.)= 0,35 mg/ 100ml= 0,0035 mg/ml
β (4. Kalibrierlösg.)= 0,4 mg/ 100ml= 0,004 mg/ml

3. Kontrolle der Stoffmenge anhand der
2.Kalibrierlösung:
• 1 µl Stammlösung enthält 0,01 mg Paracetamol
• 30 µl Stammlösung enthalten 0,3 mg=0,0003g
Paracetamol
• Da diese 0,0003g auf 100 ml aufgefüllt werden, ist
die Massenkonzentration der 2. Stammlösung
0,0003g/100ml
• Also in 1 ml = 0,000003 g/ml≙0,000003 g/ 1000µl

• Auf die HPLC-Säule gehen aber nur 20 µl
0,000003 = 6*10 -8 g sind in der injizierten Probe
50 enthalten
M( Paracetamol)= 151,17 g/mol
n= 6*10-8 g = 3,969*10-10mol < 1*10-9
151,17 g/mol
die Kalibrierlösung darf injiziert werden

4. Ansetzen des Eluenten (Methanol: 0,1% Phosphorsäure)
• Im Verhältnis (40:60) daraus ergibt es sich für 500ml Eluent:
200 ml Ethanol und 300 ml 0,1% Phosphorsäure abgemessen
• Hergestellt aus einer ortho-Phosphorsäure mit w=85%
• Verdünnungsberechnung durch Mischungskreuz:
für für
85 g 340g
H3PO4 = 85% 0,1g = 0,4g
0,1%
H2O = 0% 84,9g = 339,6g
• Den angesetzten Eluenten haben wir anschließend mit Helium
entgast.

Probenaufbereitung
Als erstes wurde die Tablette gewogen und die Verdünnung
berechnet. Eine Tablette enthält 333mg Paracetamol.
• Tablette wiegt: 0,4991g = 499,1mg
499,1mg = 100% x = 66,72%
333 mg = x %
499,1mg enthalten 333mg Paracetamol
499,1mg = 333mg
x mg = 35mg x = 52,4580mg auf 100ml
26,2290mg auf 50ml
• Der Peak Probe soll zwischen den Standards liegen.
• Dazu haben wir nun ausgerechnet, wie viel mg von der Tablette
eingewogen werden muss, damit der Peak richtig erscheint. So
haben wir die Menge eingewogen für 35mg Wirkstoff
(Paracetamol).

Einwaage an Tablette: 0,0264g
Die eingewogene Masse der
Tablette wurde auf 50ml aufgefüllt.
Daraus wurden 1ml
entnommen und auf
100ml aufgefüllt.

Fehlerbetrachtung
• Falsche Einwaage
• Benutzung verschiedener Eppendorfpipetten
• Falsche Verdünnung der Probe
• Probe konnte nicht filtriert werden, da keine
Spritzenfilter mehr vorhanden waren
• Schlechte Löslichkeit der Tablette (Paracetamol)
• Falsches Lösemittel (ohne Säure; nur Methanol und
dest. Wasser)
• Das Verhältnis, wie die Probe bzw. Standards
verdünnt worden sind, war sehr groß, welches zu
einem großen systematischen Fehler geführt hat

ERGEBNIS
- Chromatogramme der Standards
- Kalibriergeraden
- Chromatogramme der Probe
- Berechnung des Endergebnisses

60
50
40
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5
50
0
Standard 1 Standard 2
Time (min)
Standard 3 Standard 4
0 1 2 3 4
Time (min)
50
0
100
50
0
0 1 2 3 4
Time (min)
0 1 2 3 4
Time (min)

Peakfläche
12
10
8
6
4
2
0
Kalibriergeraden
Paracetamolgehalt in Vivimed
y = 26,011x
R 2 = 0,9988
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 0,4 0,45
Konzentration [mg/100ml]
Kalibriergerade Linear (Kalibriergerade)

mAU
20
10
0
1. Probenlauf 2. Probenlauf
0 1 2 3 4
Time (min)
mAU
20
10
0
0 1 2 3 4
Time (min)

Berechnung des Endergebnisses
Massenkonzentrationen der Proben:
1. Probenlauf: 0,181691 mg/100ml umgerechnet 0,181691mg/26,4mg
2. Probenlauf: 0,179696 mg/100ml
Eine Tablette wiegt ca. 499,1 mg und soll 333mg
Paracetamol enthalten.
Einwaage der Tablette: 26,4 mg/50ml (Verdünnungsfaktor 100)
Paracetamolgehalt pro 26,4 mg Einwaage
1. 0,181691 mg * 100 = 18,1691 mg
2. 0,179696 mg * 100 = 17,9696 mg

Berechnung des Endergebnisses
Mittelwert: 18,1691 mg + 17,9696 mg = 18,0694 mg
26,4 mg = 18,0694 mg
499,1 mg = x
x = 499,1 mg * 18,0694 mg = 341,6075 mg Paracetamol
26,4 mg
Endergebnis: In der Tablette wurden statt 333 mg
Wirkstoff 341,6075 mg gefunden.
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