IMMUNHÄMATOLOGISCHE UNTERSUCHUNGSMETHODEN

tionen angewandt.
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Hier soll nur das prinzipielle Vorgehen dargestellt werden.
4.3.2 Der Drei-Stufentest als Minor-Ansatz: (siehe Abbildung I)
1. Stufe (Auffinden von kompletten Antikörpern): Patientenserum (Empfänger) wird mit
Spendererythrozyten vorsichtig gemischt und bei Raumtemperatur inkubiert. Anschließend wird
zentrifugiert und auf Hämolyse und Agglutination (=direkte) geprüft.
2. Stufe (Antikörperbeladungsphase des indirekten COOMBS- Tests; sieht Abbildung 2): Man gibt
nun zu diesem Ansatz einen Reaktionsverstärker (Supplement), der die Antigen-Antikörperreaktion
verstärkt, mischt vorsichtig und inkubiert bei 37° C, zentrifugiert und liest auf Hämolyse und
Agglutination (= indirekte) ab.
3. Stufe (ldentifikation inkompletter Antikörper in der Agglutinationsphase des indirekten
COOMBS-Tests; siehe Abbildung 2): Die Spendererythrozyten des Ansatzes werden 3 mal mit
physiologjscher Kochsalzlösung gewaschen. Antihumanglobulin (COOMBS Serum) wird
zugegeben, vorsichtig gemischt, zentrifugiert und auf Hämolyse und Agglutination (indirekte)
abgelesen. Der Waschprozeß dient dazu, humane Globuline des Empfängerserums, die nicht
spezifisch an die Erythrozyten über eine Antigen-Antikörperreaktion gebunden sind. zu entfernen.
Ohne Waschprozeß würden diese nicht spezifisch gebundenen Globuline das Antihumanglobulin
"neutralisieren" (verbrauchen). Damit könnten die Antikörper, die spezifisch an erythrozytäre
Antigene gebunden sind, nicht über den Antihumanglobulintest nachgewiesen werden.
"4. Stufe" (COOMBS-Kontrolle): Bei negativer 3. Stufe werden COOMBS-Kontrollzellen zum
Ansatz gegeben, vorsichtig gemischt und auf Hämolyse und Agglutination abgelesen. Dieser
Untersuchungsschritt überprüft als positive Kontrolle die Funktionsfähigkeit der 3. Stufe, indem
Testerythrozyten, die mit inkompletten Antikörpern beladen sind, im Anschluß an die 3. Stufe zum
Ansatz gegeben werden und zur Agglutination führen.