Laboratoriekursus 2011
Laboratoriekursus 2011
Laboratoriekursus 2011
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
<strong>Laboratoriekursus</strong><br />
<strong>2011</strong><br />
Øvelsesvejledninger<br />
Biologi B<br />
VUC Århus, HF-afdelingen Bülowsgade 68, 8000 Århus C<br />
På kursusdagene kan du få fat på os på telefon 87322583
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Indholdfortegnelse:<br />
Velkomstbrev side 3<br />
Vejledning i rapport og journalskrivning side 4-5<br />
Øvelsesvejledninger:<br />
Øvelse nr. 1: Bestemmelse af primærproduktionen side 6-9<br />
Øvelse nr. 2: Forsøg med osmose i kartofler side 10-14<br />
Øvelse nr. 3: Metode til påvisning af stivelse og maltose side 15-18<br />
Øvelse nr. 4: Forsøg med enzymet spytamylase side 19-23<br />
Øvelse nr. 5: Bestemmelse af kondital side 24-28<br />
Øvelse nr. 6: Måling af blodglukose ved indtagelse af kulhydrater side 29-33<br />
Øvelse nr. 7: Bestemmelse af egen blodtype side 34-38<br />
Øvelse nr. 8: ELISA-test påvisning af "kyssesyge" side 39-44<br />
Øvelse nr. 9: Mitosen - den almindelige celledeling side 45-50<br />
2
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Kære selvstuderende i biologi.<br />
Vi ønsker dig velkommen på laboratoriekursus på VUC Århus.<br />
Kurset afholdes i biologilokale SJ 10,<br />
som er beliggende i VUC's bygning Sct. Joseph<br />
Bülowsgade 68, 8000 Århus C<br />
Om kurset:<br />
Laboratoriekurset omfatter den eksperimentelle del i faget biologi B og er en forudsætning for at<br />
blive indstillet til prøve i faget. For at få udstedt et kursusbevis kræver det, at du har udført alle<br />
forsøgene på kurset, at dine rapporter lever op til de krav der stilles i rapporten og at rapporterne<br />
afleveres rettidigt - afleveringsfristerne meddeles på kurset. Til eksamen, på din egen skole, skal<br />
du huske at medbringe de rettede rapporter, dine journaler og dit kursusbevis.<br />
Kursusmaterialet indeholder:<br />
En vejledning i rapportskrivning<br />
En Vejledning til hver øvelse<br />
Først i hver øvelsesvejledning finder du et punkt kaldet "relevant baggrundsstof" her henvises<br />
der til den teori, det kan være relevant at sætte sig ind i, inden du skal lave øvelsen. Bagest i hver<br />
vejledning finder du en "rapportvejledning", der giver dig en disposition til hvad din rapport bør<br />
indeholde.<br />
Forberedelse til kurset:<br />
Det forventes at du inden kurset har printet kursusmaterialet ud og medbringer dette på kurset.<br />
Og at du til de enkelte kursusdage forbereder dig til forsøgene dvs. som et minimum læser dine<br />
øvelsesvejledninger og sætter dig grundigt ind i hvordan forsøgene skal udføres. Husk også at<br />
laboratoriekurset er et godt tilbud til at få diskuteret faglige spørgsmål undervejs.<br />
På kurset skal du medbringe:<br />
Dit kursusmateriale, lærebog, lommeregner, blyant og papir. Da kurset afholdes en weekend er<br />
der desværre ikke mulighed for at købe mad på stedet. Det er derfor en god ide at medbringe en<br />
madpakke eller du kan købe mad i nærheden. Der er både en kiosk og et pizzaria. Kaffe og te laver<br />
vi selv og skolen har også en mikrobølgeovn.<br />
Hvis porten til skolen er låst når du ankommer eller hvis du er blevet forsinket kan du kontakte<br />
kursets lærere på tlf. 87 32 25 83 i kursustiden.<br />
Med venlig hilsen<br />
Biologilærerne på VUC Århus<br />
3
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Vejledning i rapportskrivning.<br />
I forbindelse med det eksperimentelle arbejde udarbejdes der rapporter over de udførte forsøg.<br />
Rapporten er en skriftlig formidling af et eksperimentelt arbejde til en modtager. Rapporten skal<br />
derfor være formuleret præcist, og den skal være saglig og objektiv. Læseren er dig selv og<br />
læreren. Rapporten skal skrives så begge parter hurtigt forstår indholdet - også lang tid efter det<br />
pågældende forsøg er lavet. (Rapporterne skal bl.a. bruges i eksamenssituationen).<br />
For at kunne skrive en fyldig rapport skal man have gjort personlige notater under udførelsen af et<br />
forsøg. Disse personlige notater er kun til en selv og behøver derfor ikke være så formfuldendte,<br />
men dog alligevel så klare og tydelige at de giver et godt grundlag for rapporten. Heri nedskrives<br />
fremgangsmåde, eventuelle ændringer i forhold til vejledningen, kladde til resultater (gerne i<br />
skemaform), stikord om resultaterne og eventuelle spørgsmål og konklusioner man kommer i<br />
tanke om undervejs. Ofte vil det være en god idé at styre notaterne efter de samme punkter som<br />
en rapport senere skal bygges op over.<br />
En biologirapport skal give læseren svar på følgende:<br />
Hvad har vi undersøgt?<br />
Hvordan er forsøget udført?<br />
Hvilke resultater er der kommet ud af det?<br />
Hvilken betydning kan det have?<br />
Rapporten opbygges efter nedenstående punkter i den angivne rækkefølge:<br />
Forsøgets titel: Der laves en forside med forsøgets titel, nummer, navn og holdnummer. Hvis I<br />
arbejder flere sammen skrives gruppens navne på.<br />
Forsøgets formål: Her noteres formålet med forsøget. Ofte vil der være en hypotese, der skal<br />
afprøves, men formålet kan også være at anvende noget specielt apparatur.<br />
Forsøgets hypotese: Ofte kan det være godt at formulere en eventuel hypotese som et<br />
selvstændigt afsnit.<br />
Teori til forsøget: I dette afsnit skal du i en kortfattet form præsentere den teori der hører til<br />
forsøget. Undlad at skrive afsnit direkte af fra lærebogen, prøv i stedet selv at formulere teorien i<br />
dit eget sprog. Husk også at præsentere de centrale begreber, der knytter sig til emnet.<br />
Materialer: Under dette punkt anføres hvilke dyr/planter der er anvendt, hvilke kemikalier der er<br />
brugt samt anvendt apparatur. Hvis der ikke er afvigelser fra den udleverede øvelsesvejledning,<br />
kan du nøjes med at henvise hertil (husk at vedlægge vejledningen).<br />
4
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Fremgangsmåde: Under dette punkt beskrives, hvordan forsøget er udført. Gør det kort og klart<br />
og i logisk rækkefølge. Skriv hvad du/ gruppen har gjort, dvs. brug jeg form. Det kan i mange<br />
tilfælde være en fordel at tegne forsøgsopstillingen for at gøre tingene mere overskuelige.<br />
Resultater: Alle iagttagelser og målinger (data) skal naturligvis med i rapporten.I det omfang det er<br />
rimeligt, skal resultaterne af hensyn til overskueligheden anføres i skemaform, tabelform og i<br />
kurveform.<br />
Afbildning af resultater/kurvetegning:<br />
- Giv figurer og tabeller en titel, samt en kort tekst, der fortæller, hvad kurven viser.<br />
- Ved tegning af kurver vælges en hensigtsmæssig inddeling af akserne.<br />
- Angiv benævnelse og enheder på alle akser.<br />
- Markér punkterne tydeligt på kurven, afvigende resultater skal også anføres.<br />
- Få punkter forbindes med rette linjer - mange punkter tegnes som blød kurve.<br />
- Hvis værdier mangler stiples linjen.<br />
- To kurver der skal sammenlignes bør altid have samme inddeling.<br />
Fejlkilder: Her anføres overvejelser om fejlkilder og usikkerheder under forsøgets udførelse. Ideer<br />
til forbedringer eller udvidelse af forsøget kan ligeledes beskrives her.<br />
Diskussion: Under dette punkt diskuteres forsøgsresultaterne (både de forventede og de<br />
uventede). Dette gøres ved, at man analyserer og tolker de opnåede resultater. Du bør besvare<br />
følgende spørgsmål:<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
Har forsøget vist, hvad man teoretisk kunne forvente (er hypotesen bekræftet)?<br />
Er formålet/formålene med forsøget blevet opfyldt?<br />
Kan fejlkilder forklare eventuelle afvigelser?<br />
Er alle nødvendige kontrolforsøg blevet udført?<br />
Ofte indeholder den trykte vejledning nogle diskussionsspørgsmål, der skal besvares. Sådanne<br />
spørgsmål skal tjene som inspiration og skal derfor ikke besvares med ja/nej, men indgå i en<br />
samlet diskussion af data.<br />
Konklusion: Som afslutning på rapporten anføres den konklusion, som kan drages ud fra<br />
forsøgsresultaterne. Ofte vil det være en stillingtagen til den hypotese, som blev efterprøvet i<br />
forsøget. Mens diskussionen er fyldig og bredt formuleret, skal konklusionen være kortfattet og<br />
formuleret så præcist som muligt. Konklusionen skal være en konklusion på det der var forsøgets<br />
formål.<br />
Litteratur: Her anføres den litteratur, der har været anvendt ved udarbejdelse af såvel forsøget<br />
som rapporten.<br />
5
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Eksperiment nr.:<br />
Bestemmelse af primærproduktionen<br />
ved O 2 - metoden<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
6
VUC Århus<br />
Øvelsevejledning: Bestemmelse af primærproduktionen ved O 2 - metoden.<br />
Lab.B11<br />
Relevant baggrundsstof:<br />
Fotosyntese og respiration, planternes primærproduktion.<br />
Teori:<br />
Grønne planter er i stand til at danne glukose ud fra kuldioxid og vand, samt energi i form af sollys.<br />
Dette foregår i planternes grønkorn ved processen fotosyntese. Planterne optager kuldioxid<br />
gennem deres spalteåbninger, som oftest sidder på undersiden af bladet. Vand optages gennem<br />
rødderne sammen med de næringssalte planten har brug for, til at danne alle de organiske stoffer<br />
der indgår i dens opbygning.<br />
Hos vandplanter er den mest anvendte kulstofkilde HCO 3 - . Hydrogencarbonat-ionen fremkommer<br />
når CO 2 opløses i vand (kulsyres ligevægtssystem). At vandplanterne kan udnytte<br />
hydrogencarbonat-ionen til fotosyntesen skyldes, at de har et enzym der katalyserer processen:<br />
2 HCO 3<br />
-<br />
CO 2 + CO 3 -- + H 2 O<br />
den frigjorte CO 2 udnyttes herefter til fotosyntesen.<br />
Da planterne er første led i en fødekæde, kaldes de for primærproducenter. Planter har imidlertid<br />
brug for energi til forskellige livsprocesser, den får de ved at udføre en respiration.<br />
Respirationsprocessen foregår i plantens mitochondrier, som ligger i cellens cytoplasma. Ved<br />
respirationen kan planten ved brug af glukose og ilt frigøre energien i glukosen.<br />
Fotosyntesen : 6CO 2 +6H 2 O +lysenergi C 6 H 12 O 6 +6O 2<br />
Respirationen : C 6 H 12 O 6 + 6O 2 6CO 2 + 6H 2 O + energi i form af ATP<br />
Bemærk fotosyntesen er en opbygningsproces, hvor der opbygges organiskstof i form af glukose,<br />
mens respirationen er en nedbrydningsproces, hvor den dannede glukose nedbrydes og omsættes<br />
til energi i form af ATP.<br />
ATP, Adenosin-Tri-Phosfat er den universelle energiform i cellen.<br />
Den totale mængde organisk stof, som planten har dannet ved fotosyntesen kaldes<br />
bruttoprimærproduktionen (BPP). Den del af produktionen, der er tilbage når planten har brugt<br />
energi til egne livsprocesser ved respiration (R), kaldes nettoprimærproduktionen (NPP). Det er<br />
således nettoprimærproduktionen som kan føres videre i fødekæden. Primærproduktionen<br />
opgives ofte pr. tidsenhed (år) og pr. arealenhed (km 2 ).<br />
Følgende sammenhæng haves: BPP = NPP + R, NPP kaldes også for tilvæksten<br />
7
VUC Århus<br />
Formål:<br />
At bestemme en vandplantes primærproduktion i løbet af et døgn, samt iagttage under hvilke<br />
forhold planten udskiller O 2 og optager O 2 .<br />
Lab.B11<br />
Materialer:<br />
Til forsøget benyttes vandplanter, da disse er lettere at arbejde med. Vandplanter har ingen<br />
spalteåbninger, da bladpladerne kun er få cellelag tykke. Læg eventuelt et blad under mikroskopet<br />
og se på grønkorn og cytoplasmastrømninger.<br />
to portioner afvejet vandplante (Elodea)<br />
tre Bluecap flasker 500ml<br />
vand fra hanen<br />
evt. mineralvand (CO 2 )<br />
iltmåler<br />
staniol<br />
stor plastikspand med vand<br />
Metode:<br />
Til at bestemme en plantes primærproduktion i et soldøgn, vil vi benytte den såkaldte O 2 -metode.<br />
Metoden forudsætter at planten optager O 2 fra vandet til sin respiration og udskiller O 2 ved sin<br />
fotosyntese. Ændringen i vandets oxygenindhold, fra start til slut, kan på den måde føre frem til en<br />
værdi for plantens nettoprimærproduktion og respiration.<br />
Der opstilles tre forsøg:<br />
Forsøg Plante Vand CO 2 Lys O 2 indhold start O 2 indhold slut<br />
kontrolflaske + +<br />
lysflaske + + + +<br />
mørkeflaske + + + <br />
Der måles iltindhold inden flaskerne lukkes. Flaskerne skal lukkes så der ikke er luftlommer, dette<br />
gøres ved at skrue hætten på under vand. Stil flaskerne i samme miljø (lys i 12 timer et soldøgn).<br />
Beregning:<br />
Følgende sammenhæng gælder: BPP = NPP + R, hvor man kan finde:<br />
NPP = lysflaske/slut – lysflaske/start (mg O 2 /liter )<br />
R = mørkeflaske/start – mørkeflaske/slut (mg O 2 /liter)<br />
Det er nu muligt at omregne mængden af oxygen til milligram glukose ud fra følgende<br />
sammenhæng:<br />
6CO 2 + 6H 2 O + lysenergi C 6 H 12 O 6 + 6O 2<br />
264g/mol 108g/mol 180g/mol 192g/mol<br />
Ud fra fotosynteseligningen og de forskellige reaktanter- og produkters molmasse, finder vi<br />
at 1g oxygen udskilt ved fotosyntesen svarer til 0,94g glukose da forholdet mellem dem er<br />
180g/mol :192g/mol = 0,94.<br />
8
VUC Århus<br />
Rapportvejledning:<br />
Lab.B11<br />
Teori:<br />
Nævn forskellige forhold, der har betydning for primærproduktionens størrelse.<br />
Hvilke næringsalte har planterne behov for og hvad bruger planten dem til?<br />
Hvor meget energi går der til plantens vækst og til dens nødvendige livsprocesser?<br />
Hypotese:<br />
Hvad forventer du der vil ske med O 2 indholdet i de tre forsøgsflasker.<br />
Materialer/metode:<br />
Skriv kun hvis der er ændringer i forhold til øvelsesvejledningen. ændringer<br />
Resultatbehandling:<br />
Opstil et skema med forsøgsresultaterne.<br />
Beregn NPP udtrykt som mg O 2 produceret/gram plante/soldøgn.<br />
Beregn R udtrykt som mg O 2 produceret/gram plante/soldøgn.<br />
Beregn BPP udtrykt som mg O 2 produceret/gram plante/soldøgn.<br />
Omregn den mængde oxygen, der er et udtryk for NPP, til mængden af glukose produceret<br />
pr.gram plante i et soldøgn.<br />
Udregn NPP (i gram glukose pr.gram plante) på årsbasis, idet du antager at fotosyntesen kan finde<br />
sted i 240 dage på et år.<br />
Beregn hvor stor en procentdel af energien (proportional med mg O 2 ) der er gået til plantens<br />
respiration henholdsvis nettoprimærproduktion.<br />
Diskussion:<br />
1. Forklar hvilke processer der er foregået i de to glas med planter<br />
2. Hvorfor er det nødvendigt at afveje plantematerialet?<br />
3. Hvorfor må der ikke være luftlommer i glassene ved start?<br />
4. Hvorfor laver vi forsøget med vandplanter?<br />
5. Hvor stor en procentdel udgør den energi der går til henholdsvis respirationen og tilvæksten<br />
(NPP) Stemmer de fundne resultater overens med de teoretiske værdier?<br />
Konklusion:<br />
Fejlkilder: Er der fejlkilder i dette forsøg?<br />
9
VUC Århus<br />
Eksperiment nr.:<br />
Lab.B11<br />
Forsøg med osmose<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
10
VUC Århus<br />
Øvelsesvejledning: Forsøg med osmose<br />
Lab.B11<br />
Relevant baggrundsstof:<br />
Plantecellens opbygning, cellemembranens opbygning og transportformer gennem<br />
cellemembranen.<br />
Teori:<br />
Alle celler er afgrænset af en cellemembran. Membranen er fortrinsvis opbygget af fedtstoffer<br />
(fosfolipider) og proteiner og er karakteriseret ved, at den kun tillader visse stoffer at passere<br />
igennem (kaldes semipermeabel). Cellemembranens egenskaber gør det muligt for cellen at<br />
opretholde et indre miljø, der er forskelligt fra omgivelserne.<br />
Forskellige opløste stoffer kan bevæge sig gennem membranen på forskellig måde afhængig af<br />
deres størrelse eller andre egenskaber. Man taler her om forskellige transportformer gennem<br />
membranen.<br />
En af de mekanismer der driver stoffer gennem membranen er diffusion. Ved diffusion forstår<br />
man molekylernes egenbevægelse gennem membranen. Denne bevægelse er ikke<br />
retningsbestemt, men generelt vil et stof bevæge sig fra et sted med høj koncentration af det<br />
pågældende stof mod et sted med lav koncentration af stoffet. Molekylerne bevæger sig ad en<br />
koncentrationsgradient fra høj til lav koncentration. Et eksempel kunne være diffusionen af ilt fra<br />
lungerne til blodet.<br />
En særlig form for diffusion er bevægelse af vand gennem en cellemembran, dette fænomen<br />
kaldes for osmose. Forestil dig en celle omgivet ferskvand Cellens indre (cytoplasma) består af<br />
vand med opløste stoffer - det kan være sukker, salte eller proteiner. Da molekylerne i<br />
cytoplasmaet er for store til at gå gennem membranen, vil der ske det at vandet udenfor cellen vil<br />
bevæge sig gennem membranen.<br />
Da vandet bevæger sig ved hjælp af diffusion, vil vandets nettobevægelse være fra den side af<br />
membranen hvor koncentrationen af vand er høj til den side, hvor koncentrationen af vand er lav.<br />
Man siger vandet har bevæget sig ved osmose.<br />
Den mængde vand, der kan passere over membranen vil være bestemt af, hvor stor en<br />
koncentration der er af "osmotisk aktive stoffer" på de to sider af membranen. Med osmotisk<br />
aktive stoffer menes der stoffer, som ikke uden videre kan passere cellemembranen. Det tryk der<br />
opstår som følge af forskellen i koncentrationen af opløste stoffer på de to sider af<br />
cellemembranen kaldes det osmotiske tryk.<br />
Formål:<br />
• At påvise osmosefænomenet - vands diffusion fra en højere til en lavere<br />
koncentration af vand.<br />
• At undersøge hvilken sammenhæng, der er mellem vand-/salt-koncentration<br />
og vægtændringerne i vores kartoffel.<br />
• At undersøge hvilken koncentration af salt, der modsvarer koncentrationen inde i<br />
kartoffelcellerne.<br />
• At beregne det osmotiske tryk i en kartoffelcelle.<br />
Materialer:<br />
11
VUC Århus<br />
Kartofler, propbor (evt. kniv), saltopløsninger med forskellige koncentrationer, analysevægt,<br />
køkkenrulle, reagensglas (evt. små bægerglas).<br />
Lab.B11<br />
Fremstilling af saltopløsninger:<br />
Saltopløsningerne laves som fortyndinger af den mest koncentrerede opløsning, nemlig 8%<br />
saltopløsningen. Af denne 8 % “stamopløsning” laves 1 L (= 1000 mL) ved at opløse 80 gram<br />
salt (NaCl) i demineraliseret vand til det samlede rumfang er i alt 1L.<br />
Fortyndingerne foregår derefter efter skemaet:<br />
koncentration af<br />
færdig<br />
saltopløsning<br />
der skal bruges<br />
følgende rumfang 8%<br />
saltopløsning<br />
0% 0,0 mL 250 mL<br />
0,5% 15,6 mL 250 mL<br />
1,0% 31,3 mL 250 mL<br />
1,5% 46,9 mL 250 mL<br />
2,0% 62,5 mL 250 mL<br />
2,5% 78,1 mL 250 mL<br />
3,0% 93,8 mL 250 mL<br />
4,0% 125,0 mL 250 mL<br />
6,0% 187,5 mL 250 mL<br />
8,0% 250,0 mL --------<br />
+ en ukendt opl.<br />
der fortyndes op til et<br />
rumfang på i alt<br />
Metode:<br />
Hvert hold laver et antal propborkerner eller homogene kartoffelstykker svarende til antallet af<br />
saltopløsninger. Hvert af kartoffelstykkerne vejes omhyggeligt (3 decimaler), hvorefter de kommes<br />
ned i hvert sit reagensglas med hver sin saltkoncentration.<br />
Kartoflen dækkes med 20 mL saltopløsning i hvert glas.<br />
NB! Vægten af de enkelte kartoffelstykker noteres ned sammen med den saltkoncentration de<br />
hver især udsættes for.<br />
Glassene med kartoffelstykkerne står nu i køleskabet - overdækket med plastfilm eller lignende i<br />
et døgn. Herefter fiskes de op af glassene og vejes efter kort at have ligget til afdrypning (ikke<br />
klemme) på et stykke køkkenrulle.<br />
Resultatbehandling:<br />
Vægtændringen i % beregnes:<br />
(vægt efter - vægt før)<br />
vægt før<br />
x 100%<br />
Vægtændringen i % indskrives i en tabel og afbildes i et koordinatsystem med den procentiske<br />
vægtændring som funktion af saltkoncentrationen. Hvor X-aksen =saltkoncentration i % og Y-<br />
aksen= vægtændring.<br />
12
VUC Århus<br />
Den saltkoncentration, der modsvarer koncentrationen af osmotisk aktive stoffer inde i<br />
kartoffelceller bestemmes ud fra grafen. Kaldes også for den isotoniske saltopløsning.<br />
Lab.B11<br />
Beregning af det osmotiske tryk i kartoffelcellerne:<br />
Ved hjælp af nedenstående formel kan det osmotiske tryk (Ψ) i en kartoffelcelle bestemmes:<br />
Ψ = iCRT, hvor<br />
i = 1,9 (en konstant for en næsten ideal opløsning)<br />
R= 0,0821 L atm K -1 mol -1 (gaskonstanten)<br />
T= 298K (temperaturen i Kelvingrader)<br />
C er den molære koncentrationen af NaCl<br />
( M NaCl = 58,5 g/mol )<br />
Den molære koncentration, C, beregnes ud fra den isotoniske saltopløsning som:<br />
% salt opløsning aflæst omregnet til gram salt / liter<br />
M NaCl<br />
13
VUC Århus<br />
Rapportvejledning:<br />
Lab.B11<br />
Teori:<br />
Beskriv hvad der vil ske med en celle under følgende forhold:<br />
• Cellen placeres i en vandigopløsning hvis koncentration af opløste stoffer er højere end<br />
inde i cellen (hypertonisk opløsning)<br />
• Cellen placeres i en vandigopløsning hvis koncentration af opløste stoffer er lavere end<br />
inde i cellen (hypotonisk opløsning)<br />
• Cellen placeres i en vandigopløsning der netop svarer til cellen egen koncentration af<br />
opløste stoffer (isotonisk opløsning)<br />
Hypotese:<br />
Formuler ud fra ovenstående teori en hypotese til forsøget.<br />
Resultater:<br />
Tegn grafen og aflæs ved hvilken saltkoncentration opløsningen er isotonisk.<br />
Find ligeledes koncentrationen af den "ukendte opløsning".<br />
Diskussion / konklusion:<br />
Hvor stort var det osmotiske tryk i cellen?<br />
Gør rede for hvorfor plantecellen er i stand til at modstå så et højt tryk?<br />
Forklar hvordan koncentrationen af opløste næringssalte i jorden har betydning for plantens evne<br />
til at optage vand gennem rodnettet.<br />
Diskuter princippet bag saltning/syltning ved konservering af fødevarer.<br />
Har du forslag til udvidelse/ændringer af forsøget?<br />
14
VUC Århus<br />
Eksperiment nr.:<br />
Lab.B11<br />
Metode til påvisning af stivelse og maltose<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
15
VUC Århus<br />
Øvelsesvejledning: Metode til påvisning af stivelse og maltose.<br />
Lab.B11<br />
Relevant baggrundstof:<br />
kulhydraters opbygning, enzymer og fordøjelsesprocessen.<br />
Teori:<br />
Når vi i kosten indtager kulhydrater, skal disse spaltes inden kroppen kan udnytte dem. Denne<br />
spaltning er en del af vores fordøjelse. Spaltningen af kulhydrater starter allerede i mundhulen,<br />
hvor der med udskillelsen af spyt også tilsættes et enzym, spytamylase. Da fødens opholdstid i<br />
munden er begrænset fortsætter fordøjelsen af kulhydrater, når føden kommer ned i<br />
tolvfingertarmen og<br />
tyndtarmen, hvor der udskilles en række enzymer, som nedbryder kulhydraterne til den mindste<br />
enhed nemlig monosakkarider.<br />
Føden indeholder forskellige typer af kulhydrater:<br />
Monosakkarider:<br />
Simple sukkerarter som består af et sukkermolekyle f.eks.glukose, fruktose og galaktose.<br />
Disakkarider:<br />
Sukkerarter der er opbygget af to monosakkarider, f.eks. maltose (2 glukose), sakkarose<br />
(glukose+fruktose) eller laktose (glukose + galaktose)<br />
Polysakkarider:<br />
Er store molekyler der er opbygget af mange tusinde glukose molekyler f.eks. stivelse (amylose)<br />
og cellulose (kostfibre/plantecellevægge).<br />
Karakteristisk for de simplekulhydrater er, at de smager sødt mens polysakkariderne ikke rigtig<br />
smager af noget - tænk selv efter!<br />
Formål:<br />
Når man laver forsøg med enzymer, har man brug for at kunne påvise, at en spaltning har fundet<br />
sted f.eks. i forbindelse med nedbrydning af stivelse.<br />
Stivelse + spytamylase maltose<br />
maltose + maltase 2 glukose<br />
substrat enzym produkt substrat enzym produkt<br />
Øvelsens formål er at afprøve en metode til påvisning af forskellige kulhydrater.<br />
Resultatet af dette forsøg kan benyttes, hvis man arbejder med enzymet spytamylase.<br />
Spytamylase spalter stivelse til maltose.<br />
Bemærk: De fleste enzymer navngives efter ordstammen til den forbindelse eller reaktion de<br />
deltager i, tilføjet endelsen -ase, f.eks. spalter enzymet maltase kulhydratet maltose.<br />
Materialer:<br />
16
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
10 små reagensglas 1% stivlesesopløsning<br />
En glasspatel til omrøring<br />
1% maltose-opløsning<br />
En gryde med kogende vand<br />
JJK-opløsning (jod-jod-kalium)<br />
Et bægerglas til spyt<br />
Benedict- opløsning<br />
En pipette<br />
Metode:<br />
TEST FOR STIVELSE:<br />
Opstil 5 glas af følgende indhold (der tilsættes 2 mL opløsning i hvert glas):<br />
glas 1 reagens (JJK)<br />
glas 2 vand, glas 3 stivelse, glas 4 maltose, glas 5 spyt.<br />
Noter farven på glassets indhold og tilsæt JJK til glassene 1-5.<br />
Noter farven efter reaktion.<br />
Glas nr. Indhold Farve start (uden JJK) Farve slut (med JJK)<br />
1 JJK<br />
2 Vand+JJK<br />
3 Stivelse +JJK<br />
4 Maltose + JJK<br />
5 Spyt+JJK<br />
TEST FOR MALTOSE:<br />
Opstil dernæst 5 glas med følgende indhold:<br />
glas 1 reagens (Benedict )<br />
glas 2 vand, glas 3 stivelse, glas 4 maltose, glas 5 spyt.<br />
Tilsæt Benedict til opløsningerne og noter farven på glassets indhold ved start<br />
Stil glassene i varmebad og kog i ca. 1minut. Noter farven herefter.<br />
Glas nr. Indhold Benedicts farve ved start<br />
(inden kogning)<br />
1 Benedict<br />
2 Vand+Benedict<br />
3 Stivelse +Benedict<br />
4 Maltose + Benedict<br />
5 Spyt+Benedict<br />
Benedicts farve ved slut<br />
(efter kogning)<br />
17
VUC Århus<br />
Diskussion:<br />
Lab.B11<br />
1. Hvilket af de to reagenser (JJK eller Benedict) kan bruges til at påvise stivelse og hvilken<br />
farve får prøven?<br />
2. Hvilket reagens kan bruges til at påvise maltose og hvilen farve får prøven?<br />
3. Antag vi har opstillet et forsøg, hvor man har haft et glas med stivelse og spytamylase<br />
(spyt). Forklar hvad der vil ske i glasset og hvilken farve man vil få ved test for stivelse og<br />
test for maltose, hvis al stivelsen er blevet spaltet?<br />
4. Hvorfor opstilles der et glas kun med spyt?<br />
5. Hvorfor opstilles der et glas kun med vand?<br />
Konklusion:<br />
18
VUC Århus<br />
Eksperiment nr.:<br />
Lab.B11<br />
Forsøg med enzymet spytamylase<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
19
VUC Århus<br />
Øvelsesvejledning: Forsøg med enzymet spytamylase.<br />
Lab.B11<br />
Relevant baggrundstof:<br />
Proteiner - og kulhydraters opbygning, enzymer og fordøjelsesprocessen.<br />
Teori:<br />
Enzymer er proteiner, som katalyserer kemiske reaktioner i den levende celle.<br />
En katalysator er i stand til at ændre den hastighed, hvormed en kemisk reaktion foregår.<br />
Det vil i praksis sige, at de forskellige kemiske reaktioner i cellen kun kan foregå, fordi der er<br />
enzymer tilstede. Enzymerne bliver ikke forbrugt under processen og fremtræder efter endt<br />
reaktion i uændret form.<br />
Et enzym er mere eller mindre specifikt og deltager kun i en eller få beslægtede processer.<br />
De fleste enzymer navngives efter ordstammen til den forbindelse eller reaktion de deltager i,<br />
tilføjet endelsen -ase, f.eks. spalter enzymet maltase kulhydratet maltose.<br />
To andre begreber er værd at kende nemlig substrat og produkt. Man kan sige, at den forbindelse<br />
som enzymet binder sig til kaldes substratet og det, der kommer ud af reaktionen kaldes<br />
produktet.<br />
Maltose + enzym 2 glukose + enzym<br />
substratet<br />
produktet<br />
Enzymerne kan opdeles i to kategorier: endoenzymer, som virker inde i cellen og ektoenzymer<br />
som udskilles af cellen og virker uden for denne (f.eks. fordøjelsesenzymerne).<br />
Enzymerne er opbygget af en eller flere kæder af proteiner. Herforuden indgår der ofte et såkaldt<br />
coenzym (ofte vitamindel) og en metalion (f.eks. Mg 2+ , Mn 2+ , Fe 3+ eller Zn 2+ ).<br />
apoenzym + coenzym = holoenzym<br />
proteindel vitamindel Enzymet<br />
Enzymers aktivitet afhænger af flere forskellige forhold. Typisk kan man sige, at de forhold der kan<br />
ændre et proteins struktur også vil have betydning for enzymets evne til at katalysere en reaktion.<br />
Her skal nævnes tre forhold som har betydning: temperatur, pH og tilstedeværelsen af tungmetalioner<br />
(f.eks. Hg 2+ , Cd 2+ og Cu 2+ ). Både temperatur og pH har indvirkning på proteindelens struktur<br />
og tungmetalioner kan gå ind og påvirke det reaktiveområde i enzymet. Endvidere har mængden<br />
af enzym og koncentrationen af substrat selvfølgelig også betydning for reaktionshastigheden.<br />
20
VUC Århus<br />
Formål:<br />
At undersøge forskellige faktorers indvirkning på fordøjelsesenzymet spytamylase.<br />
Enzymet findes i spyt hos mennesker og andre pattedyr og påbegynder, allerede i munden,<br />
nedbrydningen af stivelse (amylose) til simple sukkerarter (maltose).<br />
I dette forsøg undersøges hvordan temperatur, pH og kobbersulfat (CuSO 4 ) virker på<br />
enzymaktiviteten.<br />
Materialer til forsøget:<br />
Spyt (læs mundvand)<br />
1% stivelsesopløsning<br />
Iod-iodkalium opløsning<br />
Benedictopløsning<br />
0,1M HCl (saltsyre)<br />
0,5M CuSO 4<br />
pH-sticks<br />
Bægerglas til spyt<br />
reagensglas og reagensglasstativ<br />
mærkningstape, glasspatel til omrøring<br />
engangspipette til spyt<br />
termobade ved forskellige temperaturer<br />
køleskab<br />
gryde med kogende vand<br />
Metode:<br />
Forsøg med temperaturens indvirkning på enzymaktiviteten:<br />
Enzymaktiviteten undersøges ved et udvalg af temperaturer mellem 5C og 100C .<br />
Til hver temperatur opstilles 3 reagensglas:<br />
Lab.B11<br />
Glas 1 indeholder 2 ml spyt<br />
Glas 2 indeholder 4 ml stivelsesopløsning<br />
Glas 3 indeholder 4 ml stivelsesopløsning.<br />
Husk at mærke glassene med<br />
navn, nummer, indhold, m.m.<br />
temperatur navn<br />
Lad glassene stå i mindst 5 minutter og akklimatiseret ved forsøgstemperaturen.<br />
Herefter overføres de 4 ml stivelse fra glas 2 til glasset med spyt (glas1)- rør rundt.<br />
Glas 3 tilsættes ikke spyt (kontrolglas)<br />
Reaktionen får nu lov at forløbe i ca.15 minutter ved den valgte forsøgstemperatur.<br />
Afkøl de glas der har stået ved høj temperatur i et par minutter.<br />
Fordel indholdet fra hvert forsøgsglas (1-3) i to nye glas.<br />
Undersøg nu indholdet i glassene vha. Iod - og Benedict prøven som i det indledende<br />
forsøg.*)<br />
OBS: I forsøget ved 5C er det vigtigt at lave analysen på indholdet straks, så enzymerne ikke<br />
når at blive aktive dvs. Benedictprøven sættes i spilkogende vand!!!<br />
*) Forsøg med påvisning af stivelse og maltose.<br />
21
VUC Århus<br />
Forsøg med pH’s indvirkning på enzymaktiviteten (37C).<br />
Lab.B11<br />
Opstil 3 glas på følgende måde:<br />
Glas 1 indeholder 2 ml spyt + 2ml HCl<br />
Glas 2 indeholder 4 ml stivelsesopløsning<br />
Glas 3 indeholder 4 ml stivelsesopløsning.<br />
Husk at mærke glassene med<br />
navn, nummer, indhold m.m.<br />
Lad glassene stå i mindst 5 minutter og akklimatiseret ved 37C.<br />
Herefter overføres de 4 ml stivelse fra glas 2 til glasset med spyt+ HCl (glas1)<br />
omrør og mål pH i blandingen- lad blandingen stå i 5 minutter.<br />
Glas 3 tilsættes ikke spyt (kontrolglas)<br />
Reaktionen får nu lov at forløbe i ca.15 minutter ved 37C<br />
Fordel indholdet fra hvert forsøgsglas (1-3) i to nye glas.<br />
Undersøg nu indholdet i glassene vha. Iod - og Benedict prøven som i det indledende<br />
forsøg.*)<br />
OBS. Mål pH i opløsningen før og efter tilsætning af syren!<br />
Forsøg med kobbersulfats (CuSO 4 ) indvirkning på enzymaktiviteten (37C).<br />
Opstil 3 glas på følgende måde:<br />
Glas 1 indeholder 2 ml spyt + 1ml CuSO 4<br />
Glas 2 indeholder 4 ml stivelsesopløsning<br />
Glas 3 indeholder 4 ml stivelsesopløsning.<br />
Husk at mærke glassene med<br />
navn, nummer, indhold, m.m.<br />
temperatur og navn<br />
Lad glassene stå i mindst 5 minutter og akklimatiseret ved 37C.<br />
Herefter overføres de 4 ml stivelse fra glas 2 til glasset med spyt+CuSO 4 (glas1)<br />
- rør rundt og lad blandingen stå i 5 minutter.<br />
Glas 3 tilsættes ikke spyt (kontrolglas)<br />
Reaktionen får nu lov at forløbe i ca.15 minutter ved 37C<br />
Fordel indholdet fra hvert forsøgsglas (1-3) i to nye glas.<br />
Undersøg nu indholdet i glassene vha. Iod - og Benedict prøven som i det indledende<br />
forsøg.*)<br />
I ventetiden kan du formulere en hypotese og lave resultatskema.<br />
22
VUC Århus<br />
Rapportvejledning:<br />
Lab.B11<br />
Teori:<br />
Beskriv kort fødens vej gennem fordøjelsessystemet og giv eksempler på mekanisk nedbrydning og<br />
andre enzymer end dem du har arbejdet med i forsøget.<br />
Hypotese:<br />
Argumenter for hvilke resultater du forventer i de enkelte forsøg.<br />
Materialer/metode:<br />
Skriv kun hvis der er ændringer i frohold til øvelsesvejledningen.<br />
Resultater:<br />
Opstil et skema med forsøgsresultaterne<br />
Diskussion/ spørgsmål til forsøget:<br />
1. Forklar hvordan man af forsøgsresultaterne kan se, om enzymet er aktivt eller inaktivt?<br />
2. Gør rede for aktiviteten ved de forskellige forsøgstemperaturer og diskuter resultaterne i<br />
forhold til teorien.<br />
3. Ved hvilken pH er enzymet spytamylase normalt aktivt?<br />
4. Forklar hvilken betydning en ændring i pH vil have på enzymaktiviteten og gør rede for<br />
resultaterne i dit eget forsøg.<br />
5. Hvad sker der med enzymaktiviteten, når der tilsættes CuSO 4 ?<br />
6. Hvorfor er der i opstillet glas med og uden spyt ved hvert forsøg?<br />
Konklusion:<br />
Fejlkilder: Angiv her hvilke fejlkilder har haft indflydelse på dine resultater.<br />
23
VUC Århus<br />
Eksperiment nr.:<br />
Lab.B11<br />
Bestemmelse af kondital<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
24
VUC Århus<br />
Øvelsesvejledning: Bestemmelse af kondital<br />
Lab.B11<br />
Relevant baggrundstof:<br />
Blodkredsløbet, lungernes opbygning og funktion, musklernes energiomsætning under arbejde,<br />
konditionstræning.<br />
Teori:<br />
Konditallet benyttes som et udtryk for hvor god kroppen er til at udføre aerobt arbejde, fx løbe<br />
eller cykle.<br />
Evnen til at udføre dette arbejde afhænger af lungernes evne til at optage luftens ilt, hjertet og<br />
kredsløbets evne til at transportere ilten ud til musklerne og musklernes evne til at udnytte den<br />
tilførte ilt ved arbejde. Forsøget bygger på den teori, at der er en lineær sammenhæng mellem de<br />
tre størrelser: iltoptagelse, pulsfrekvens og arbejdsintensitet, og konditallet beregnes som den<br />
maksimale iltoptagelse pr. minut pr. kilo legemsvægt.<br />
For at bestemme den maksimale iltoptagelse skal man finde den maksimale arbejdsintensitet,<br />
hvilket kan gøres ved at ”køre sig selv helt ud” på kondicyklen (ergometercyklen). Der findes dog<br />
mindre anstrengende metoder, hvor man arbejder med submaksimal intensitet ( = ”under<br />
maksimal” intensitet) og det er denne type konditest, vi skal benytte os af her.<br />
Testen udføres som en to-punktstest (men kan også udføres som en tre-punktstest, hvor<br />
cykelarbejde(max) aflæses grafisk – se senere).<br />
Forsøget udføres på en kondicykel (ergometercykel). Umiddelbart inden testen skal<br />
forsøgspersonen varme op ved at cykle med meget lav belastning i 4-5 minutter. Under selve<br />
forsøget skal forsøgspersonen cykle i fem minutter på to forskellige belastninger (de kaldes<br />
arbejde 1 og arbejde 2). Kadencen skal være 60 omdrejninger pr minut (brug evt. en metronom).<br />
Den første belastning skal være således at pulsen stabiliseres i området 120-140 slag/min efter ca.<br />
5 minutters cykling.<br />
Den anden belastning skal være således at pulsen stabiliseres i området 150-170 slag/min efter<br />
yderligere 5 minutters cykling<br />
Testen giver det bedste resultat, hvis de to pulsværdier ikke kommer til at ligge for tæt. Fx vil 130<br />
og 160 være fint.<br />
Ved tre-punktstest vælges pulsværdier på: arbejde 1) 110-130 slag/min, arbejde 2) 130-150<br />
slag/min, arbejde 3) 150-170 slag/min, fx 120, 140 og 160<br />
Formål:<br />
Formålet med dette eksperiment er at beregne forsøgspersonernes kondital.<br />
Materialer:<br />
Ergometercykel (kondicykel)<br />
Pulsur med tilhørende elektrode-/sender-rem<br />
pc med software til pulsur<br />
træningstøj/T-shirt<br />
25
VUC Århus<br />
Fremgangsmåde:<br />
Cyklen indstilles, så den er behagelig at sidde/cykle på.<br />
Lab.B11<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
Pulsuret og dets senderrem monteres. Senderremmen placeres om brystkassen i<br />
hjertehøjde og fugtes så der er bedst mulig kontakt med huden og det sikres at der et<br />
forbindelse mellem sender og ur (se særskilt vejledning). Pulsregistreringen startes.<br />
Forsøgspersonen varmer nu op ved at cykle i ca. 5 minutter ved lav belastning (50-75 watt<br />
afhængig af træningstilstand, vægt og køn).<br />
I samråd med læreren bestemmes første belastning ud fra køn, alder, kropsvægt og puls<br />
ved opvarmningens ophør. Belastningen indstilles på cyklen. Køn, kropsvægt, alder og<br />
belastningen noteres i nedenstående skema!!<br />
Der cykles nu i 5 minutter med den indstillede belastning. Det bestræbes at holde den<br />
samme kadence under hele eksperimentet – fx 60 omdrejninger/minut. Er belastningen<br />
ikke for høj, vil pulsen nogenlunde have stabiliseret sig på en bestemt værdi efter de 5<br />
minutter.<br />
I samråd med læreren bestemmes anden belastning. Belastningen noteres i nedenstående<br />
skema. Belastningen indstilles på cyklen og forsøgspersonen cykler nu i 5 minutter.<br />
Stabiliserer pulsen sig ikke, er belastningen måske valgt for høj. Lad forsøgspersonen hvile<br />
til pulsen er på ca. 100 slag/<br />
min og fortsæt derefter forsøget med en lavere belastning i samråd med læreren. Der<br />
cykles nu i 5 minutter. Pulsregistreringen fortsættes endnu 5 minutter efter af cyklingen er<br />
afsluttet<br />
Pulsregistreringen afsluttes og pulsurets data overføres nu til pc’en (se vejledning i<br />
laboratoriet) og de opsamlede data udskrives og vurderes. Der skal findes to stabile<br />
pulsniveauer. Et for hver arbejdsintensitet. De fundne værdier noteres i nedenstående<br />
skema.<br />
Konditallet kan nu beregnes.<br />
Forslag til resultatskema:<br />
Køn Alder Vægt<br />
kg<br />
Belastning<br />
1. Arbejde<br />
watt<br />
Belastning<br />
2. Arbejde<br />
watt<br />
Belastning<br />
3. Arbejde<br />
watt<br />
Puls<br />
1.<br />
Arbejde<br />
slag/min<br />
Puls<br />
2.<br />
Arbejde<br />
slag/min<br />
Puls<br />
3. Arbejde<br />
slag/min<br />
Forsøgsperson<br />
Maks.-<br />
puls.<br />
slag/min<br />
Aktivitetsniveau<br />
Beregning af kondital:<br />
Til beregningerne skal den anslåede maksimale puls bruges:<br />
maksimale puls = 208 – (0,7 x alder).<br />
<br />
Herefter skal det maksimale cykelarbejde i watt findes. Det kan gøres på to måder<br />
a) ved at indsætte i denne formel (ved topunktstest):<br />
26
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
cykelarb.(max) =cykelarb(1) +<br />
puls max −puls cykelarb .1<br />
puls cykelarb .2 −puls cykelarb .1<br />
x(cykelarb. (2) − cykelarb. (1))<br />
b) grafisk ved at afbilde de to fundne pulsværdier som funktion af de tilsvarende<br />
arbejdsintensiteter i et koordinatsystem på et stykke millimeterpapir (ved både topunktstest<br />
og tre-punktstest). De to (tre) fundne punkter forbindes og stregen<br />
forlænges (ekstrapoleres) op til den skærer en vandret streg svarende til den<br />
beregnede maksimale puls. Fra skæringen mellem de to linjer tegnes en lodret linje ned<br />
på x-aksen.<br />
Det maksimale cykelarbejde (cykelarb.(max)) aflæses, hvor den lodrette linje skærer x-<br />
aksen.<br />
<br />
Det maksimale cykelarbejde (i watt) er imidlertid kun en mindre del af det maksimale<br />
arbejde kroppen udfører, da en stor del af musklernes arbejde bruges til fx<br />
gnidningsmodstanden i musklerne. Den øgede respiration og hjertets øgede aktivitet<br />
kræver også ilt. Ved cykling er den såkaldte nyttevirkning 23%. Det vil sige, at kun 23% af<br />
det arbejde musklerne udfører går til at cykle. Resten bliver til varme. Det maksimale<br />
arbejde kan derfor udregnes ud fra det maksimale cykelarbejde på følgende måde:<br />
Maksimale arbejde (i watt) = maksimale cykelarbejde (i watt) x 100/23<br />
<br />
Det maksimale arbejde omregnes til kilojoule pr. minut (kJ/min)ved at gange med 60 og<br />
dividere med 1000 (da en watt svarer til en joule pr. sekund).<br />
Maksimale arbejde (i kilojoule pr minut) = maksimale arbejde (i watt) x 60/1000<br />
<br />
Da der for hver liter ilt, der optages i kroppen, frigives 21,1 kJ, og da hvilestofskiftet svarer<br />
til et iltoptag på 0,25 liter O 2 /min, kan den maksimale iltoptagelse beregnes således:<br />
VO 2 (max) (i Liter/min) = Maksimale arbejde (i kJ/min)/21,1 kJ/Liter + 0,25 Liter/min<br />
<br />
Den maksimale iltoptagelse pr minut omregnes til kondital ved at dividere med<br />
kropsvægten og gange med tusinde (for at få værdien i mL ilt pr minut pr kilo):<br />
Kondital (mL ilt pr minut pr kilo) = VO 2 (max)(i liter pr minut) x 1000 / kropsvægt.<br />
27
VUC Århus<br />
Rapportvejledning:<br />
Lab.B11<br />
Teori:<br />
1. Forklar kort hjertets og kredsløbets funktion og opbygning.<br />
2. Hvorfor har de arbejdende muskler brug for rigelig blodtilførsel?<br />
Hypotese:<br />
Fremgangsmåde:<br />
Skriv kun hvis den anvendte fremgangsmåde afviger fra vejledningens.<br />
Resultater:<br />
1. Forsøgsresultaterne skal indføres i resultatskema.<br />
2. Udprintede pulskurver vedlægges.<br />
3. Udregningerne af konditallet vises for en enkelt af forsøgsdeltagerne. De resterende<br />
kondital angives blot.<br />
Diskussion:<br />
1. Vurdér forsøgspersonernes kondital i forhold til normalværdierne (skema udleveres i<br />
laboratoriet).<br />
2. Er der en sammenhæng mellem forsøgspersonernes aktivitetsniveau og kondital?<br />
3. Hvilken effekt vil du vurdere at rygning har på ens kondital? Begrund!<br />
4. Hvorfor skal man dividere med kropsvægten for at finde konditallet?<br />
5. Hvorledes kan man forbedre sit kondital?<br />
6. Hvilken effekt tror du en forbedret kondition vil have på pulsen ved en bestemt<br />
arbejdsbelastning? Begrund!<br />
7. Forklar pulskurvens forløb. Hvor længe er pulsen om at indstille sig på et nyt<br />
aktivitesniveau? Er der her en sammenhæng med konditallet?<br />
8. Vurdér testens fejlkilder.<br />
28
VUC Århus<br />
Eksperiment nr.:<br />
Lab.B11<br />
Måling af blodglukose-niveauet<br />
ved indtagelse af kulhydrater<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
29
VUC Århus<br />
Øvelsesvejledning: Måling af blodglukose-niveauet ved indtagelse af kulhydrater.<br />
Lab.B11<br />
Relevant baggrundsstof:<br />
kulhydraternes opbygning og fordøjelse, hormoner, regulering af blodglukosen, Glykæmisk index,<br />
diabetes.<br />
Teori:<br />
Alle kroppens celler har brug for energi blandt andet i form af glukose, især hjernen som er meget<br />
følsom, da den næsten udelukkende bruger glukose som energikilde.<br />
Endvidere er det vigtigt for cellernes indre miljø, at koncentrationen af glukose ikke svinger for<br />
meget, da glukosen er osmotisk aktiv.<br />
Når vi indtager kulhydrater nedbrydes de store kulhydrater blandt andet til glukose og fruktose,<br />
disse transporteres over i blodbanen og det er her reguleringen af blodglukosen (også kaldet<br />
blodsukkeret) starter.<br />
Efter et måltid vil koncentrationen af glukose i blodet være høj (op til 10 mmol/L) mellem<br />
måltiderne vil koncentrationen svinge mellem 3 og 6 mmol/L.<br />
Hvor meget blodglukosen stiger efter et kulhydratrigt måltid afhænger bl.a. af, hvilke typer<br />
kulhydrater man har spist, samt ens evne til at regulerer blodsukkerkoncentrationen. Tidligere<br />
troede man at stivelse var sundest, fordi den var længere tid om at blive fordøjet. Denne teori<br />
holder ikke, da der er rigeligt med fordøjelsesenzymer i tarmen. Derimod skyldes forsinkelsen<br />
snarere tilstedeværelsen af visse typer af kostfibre. Det har også vist sig at de forskellige<br />
monosakkarider ikke transporteres lige hurtigt fra tyndtarmen til blodbanen. Kartofler eller hvidt<br />
brød får således blodglukosen til at stige lige så hurtigt som ren glukose.<br />
To af de hormoner, der er ansvarlige for reguleringen af blodglukosen er insulin og glukagon.<br />
Begge hormoner produceres i bugspytkirtlens langerhanske øer i hhv. -cellerne og -cellerne.<br />
Insulin fremmer optagelsen af glukose i muskelcellerne, mens det påvirker levercellerne til at<br />
omdanne glukose til glykogen (et polysakkarid som svarer til stivelse).<br />
Glukagon virker modsat og aktiverer levercellerne til at omdanne sit depot af glykogen til glukose,<br />
når der mangler glukose i blodbanen. Foruden de to nævnte hormoner spiller hormonet adrenalin<br />
også en rolle i reguleringen af blodglukosen.<br />
Efter et måltid er koncentration af glukose i blodet høj<br />
<br />
hormonet insulin<br />
glukosen trækkes ind i muskelceller<br />
glukosen omdannes til glykogendepot i leveren<br />
Ved sult er koncentrationen af glukose i blodet lav<br />
<br />
hormonet glukagon<br />
Glykogen spaltes til glukose i levercellerne<br />
glukosen frigives til blodet<br />
30
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Diabetes mellitus (DM) er en fællesbetegnelse for flere forskellige stofskiftesygdomme, hvor<br />
omsætningen af blandt andet glukose ikke forløber, som den skal. Der skelnes mellem to typer af<br />
diabetes.<br />
Diabetes type-1, der kort fortalt skyldes manglende produktion af insulin i -cellerne og diabetes<br />
type-2, tidligere kendt som aldersdiabetes, der er en form for insulinresistens, som bevirker at<br />
cellerne ikke reagerer på hormonet insulin.<br />
Resultatet bliver i begge tilfældet at blodglukosen vil forblive meget høj efter et måltid, hvis ikke<br />
patienten behandles. På lang sigt udvikles en række følgesygdomme, her kan nævnes øget risiko<br />
for hjerte-karsygdom, blindhed, nyreproblemer og dårlig sårheling.<br />
Hvis en persons fasteblodglukose er over 7mmol/l eller hvis ikke-fastende blodglukose ligger over<br />
11,1mmol/l, har personen diabetes. Et normalt faste blodglukose ligger under 5mmol/l .<br />
Diabetes kan blandt andet konstateres ved at udføre en glukosebelastningstest.<br />
Flere oplysninger om diabetes finder du på hjemmesiden: www.diabetes.dk<br />
Tabel over glykæmisk indeks kan findes på:<br />
http://www.sundfo.dk/alt_om_ernaering/glykaemisk_indeks_tabel.htm<br />
Formål:<br />
At undersøge variationen i koncentrationen i blodglukoseniveauet efter indtagelse af forskellige<br />
kulhydrater.<br />
Materialer:<br />
bagevægt<br />
forskellige kulhydratrige fødevarer<br />
apparat til måling af blodglukose<br />
glukosticks<br />
spritservietter<br />
prikkepen<br />
tabel over det glykæmiske indeks (udleveres til øvelsen)<br />
Metode:<br />
Der vælges 2-3 forsøgs personer, som møder fastende dvs. ingen mad, drikke eller røg de sidste 2-<br />
3 timer. Personernes blodglukose måles inden forsøget starter. Personerne indtager nu hver en<br />
portion kulhydratholdigt føde svarende til 1 gram kulhydrat/ kg legemesvægt (beregnes vha.<br />
kosttabel) til maden indtages samme mængde vand 2dl.<br />
Forsøgspersonerne indtager nu den udvalgte fødevare og deres blodglukose måles med intervaller<br />
på 15-20 minutter i ca.90 minutter afhængig af om blodglukosen er<br />
faldet til normal<br />
niveau eller ej.<br />
31
VUC Århus<br />
Rapportvejledning:<br />
Lab.B11<br />
Teori:<br />
Forklar hvorfor kroppens celler har brug for glukose og gør rede for hvor og i hvilken form<br />
glukosen kan deponeres i kroppen. Gør rede for omsætningen /forbrændingen af glukosen i<br />
forbindelse med muskelarbejde. Forklar til sidst hvad det glykæmiske indeks er et udtryk for.<br />
Hypotese:<br />
Formuler dine forventninger til forsøget - hvordan forventer du blodglukosen vil stige ved<br />
indtagelse af de valgte næringsmidler?<br />
Materialer/metode:<br />
Tilføj hvis der er ændringer i forhold til øvelsesvejledningen<br />
Resultater:<br />
Lav et skema der viser forsøgspersonernes blodglukosekoncentrationer på måletidspunkterne.<br />
Tegn en kurve over forsøgsresultaterne der viser blodglukose koncentrationen, som funktion af<br />
tiden.<br />
Diskussion:<br />
1. Diskuter personernes blodglukosekoncentration inden forsøget starter. Forklar hvordan de<br />
forskellige forsøgsresultater ser ud og hvordan det passer med teorien om forskellige<br />
kulhydraters optagelse i blodet.<br />
2. Kan man se, at det glykæmiske indeks har betydning for blodsukkerstigningen i de tre forsøg?<br />
3. Hvilke kulhydrater er bedst at indtage, hvis man skal udføre et langvarigt fysisk arbejde?<br />
4. Hvordan kan blodsukkerniveauet opretholdes f.eks. under en løbetur?<br />
5. Analyser figurerne side 4 og forklar hvem af de to personer på figur 13 der har diabetes.<br />
Konklusion:<br />
Fejlkilder:<br />
32
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Figuren er hentet fra opgave 108, Biofag nr.9 1997 Særnummer/opgavesamling<br />
33
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Eksperiment nr.:<br />
Bestemmelse af egen blodtype<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
34
VUC Århus<br />
Øvelsesvejledning: Bestemmelse af egen blodtype.<br />
Lab.B11<br />
Relevant baggrundsstof:<br />
Et-gens nedarvning (Mendels 1.lov), AB0- blodtypesystemet, Rhesus-blodtypesystemet,<br />
antigener og antistoffer (immunsystemet).<br />
Teori:<br />
De to mest kendte blodtypesystemer er AB0-systemet og Rhesus-systemet. Kendskabet til en<br />
persons blodtype er vigtig i forbindelse med blodtransfusioner, organtransplantation og har<br />
tidligere været den mest anvendte metode i forbindelse med faderskabssager. Endvidere er<br />
blodtypernes genetik et godt eksempel på, hvordan egenskaber nedarves.<br />
ABO-blodtypesystemet:<br />
Inden for AB0-blodtypesystemet kan man have blodtype A, B, AB, eller 0(nul).<br />
Hvilken blodtype man har inden for AB0-systemet, bestemmes af 3 gener, der er multiple alleler.<br />
Allelerne i ABO systemet betegnes I A og I B og i.<br />
I A og I B er indbyrdes codominante, men dominerer begge over genet i, der er recessivt.<br />
Genet I står for evnen til at danne et antigen på overfladen af de røde blodceller, hvorimod genet i<br />
ikke kan danne antigener. Hos personer med genet I kan der enten dannes antigen A eller antigen<br />
B, derfor opskrives allelerne som I A eller I B .<br />
Da en persons genotype altid består af to allele gener, som man har fået fra sin mor og sin far, har<br />
man kun to af de mulige alleler i sin genotype.<br />
Blodtype = fænotype Genotype Antigen på de<br />
Antistof i serum<br />
røde blodlegemer<br />
A I A I A eller I A i antigen A anti-B<br />
B I B I B eller I B i antigen B anti-A<br />
AB I A I B antigen A og antigen B Intet<br />
0 ii ingen anti-A og anti-B<br />
Rhesus positiv DD eller Dd antigen D ingen<br />
Rhesus negativ dd ingen der kan dannes anti-D<br />
Rhesus-blodtypesystemet:<br />
Inden for dette system kan man være enten Rhesus positiv ( Rh + ) eller Rhesus negativ (Rh - ).<br />
Personer der er Rhesuspositive har et specielt antigen på deres røde blodlegemer, mens personer<br />
der er Rhesusnegative mangler dette antigen.<br />
Rhesus blodtypen styres af 2 allele gener. Det dominante gen D medfører dannelse af Rhesus<br />
antigenet hvor det recessive gen d ikke fører til antigen dannelse.<br />
35
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Antigener og antistoffer:<br />
Antigen, stof eller organisme, som fremkalder en antistofreaktion i kroppen. Antigener er ofte<br />
fremmede proteiner, men alle fremmede stoffer kan i princippet virke som mulige antigener.<br />
Antigenerne i ABO-systemet er såkaldte glykoproteiner.<br />
Du kan læse mere om dannelsen af ABO-systemets antigener i Genetikbogen, Nucleus side 51-52.<br />
Antistof, proteiner som dannes af immunforsvarets celler, og som binder sig til indtrængende<br />
fremmedstoffer (antigener). Antistof-antigenkomplekset optages af de såkaldte makrofager.<br />
Blodtypernes antigen- antistofreaktioner:<br />
Ud fra ovenstående definition af antigener og antistoffer, vil vi nu se på antigenantistofreaktionerne<br />
i de to blodtypesystemer. Princippet er at der mod et givet antigen X kan<br />
dannes et antistof anti-X, der kan binde sig til antigenet og uskadeliggøre dette.<br />
I ABO-systemet findes der to forskellige antigener, antigen A og antigen B. Det antistof der dannes<br />
mod antigen A, kaldes anti-A og det antistof der dannes mod antigen B kaldes anti-B. Når<br />
antistoffet bindes til det antigen det passer til, vil der ske en sammenklumpning af de røde<br />
blodlegemer. I praksis betyder dette, at hvis man giver en person med blodtype 0 en<br />
blodtransfusion med blod fra en person med blodtype A, vil personens blod begynde at klumpe<br />
(agglutinere), hvilket i værste fald kan være dødeligt.<br />
Et særligt forhold gør sig gældende, når man taler om antistofferne i ABO-systemet, nemlig det at<br />
kroppen danner disse antistoffer i løbet af det første leveår, selvom der tilsyneladende ikke er<br />
behov for dem. I Rhesussystemet forholder det sig til gengæld sådan, at der først dannes<br />
antistoffer, hvis kroppen præsenteres for det fremmede antigen, i dette tilfælde antigen D. Rhesus<br />
negative personer har således ikke "automatisk" antistof imod Rhesus positivt blod.<br />
Prøv at gå ind i tabellen ovenfor og efterprøv teorien om forligelige og uforligelige blodtyper.<br />
Formål:<br />
Formålet med dette forsøg er at bestemme egen blodtype og se eksempler på hvordan bindingen<br />
mellem antigener og antistoffer kan få blodet til at klumpe sammen.<br />
Materialer:<br />
Eldonkort til bestemmelse af blodtype.<br />
En spritserviet<br />
En prikkepen til at fremskaffe en dråbe blod.<br />
4 rørepinde<br />
Et bægerglas med vand<br />
En dråbepipette<br />
36
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
På Eldonkortet er der 4 felter:<br />
Et felt med antistof A (anti-A)<br />
Et felt med antistof B (anti-B)<br />
Et felt med antistof D (anti-D)<br />
Et kontrolfelt uden antistof<br />
Metode:<br />
Et Eldonkort udpakkes<br />
Tilsæt én dråbe vand med pipetten til hvert felt<br />
Rør med rørepinden til feltets antistof (farven) er opløst<br />
Vask hænderne og afsprit den finger, du skal prikkes i<br />
Klem en lille dråbe blod ud i hvert felt på kortet, uden at berøre det<br />
Tag en rørepind - en til hvert felt - og spred bloddråben ud i hele feltet<br />
Vip med kortet så prøven holdes i bevægelse<br />
Resultatet kan aflæses efter 5-10 minutter<br />
Aflæs nu hvilken blodtype du har.<br />
NB: Alt affald samles i en speciel plastikpose og destrueres!<br />
37
VUC Århus<br />
Rapportvejledning:<br />
Lab.B11<br />
Teori:<br />
Undersøg ved hjælp af opslag, hvordan de forskellige blodtyper er fordelt i Danmark.<br />
Forklar hvorfor der kan opstå komplikationer under graviditeten, hvis en vordende mor er Rhesus<br />
negativ og venter et Rhesuspositivt barn.<br />
Materialer/metode: Skriv kun hvis der er sket ændringer i forhold til øvelsesvejledningen.<br />
Resultater:<br />
Tegn Eldonkortet med dets fire felter og tegn de felter, hvor blodet klumper sammen<br />
(agglutinerer).<br />
Ved hjælp af de to første felter kan du aflæse hvilken blodtype du har I ABO-systemet. I det tredje<br />
felt kan du aflæse din blodtype med hensyn til rhesusfaktoren. Du skal bruge din viden om, hvilke<br />
antigener, der binder til de antistoffer, der er på kortet.<br />
Diskussion:<br />
1. Undersøg ved hjælp af opslag, hvordan de forskellige blodtyper er fordelt i Danmark<br />
2. I øvelsen har du bestemt din blodtype. Forklar hvilken reaktion, der er sket på kortet.<br />
3. Hvorfor er det vigtigt ved blodtransfusioner, at modtageren og donorens blod er af samme<br />
type?<br />
4. Hvorfor kan man sige, at en person med blodtypen AB er universalmodtager?<br />
5. Hvorfor er en person med blodtype 0 universaldonor?<br />
6. Hvorfra kan man skaffe sig de antistoffer, som er påsat Eldonkortet?<br />
7. Forklar hvorfor et forældrepar der begge er rhesuspositive godt kan få et barn der er<br />
rhesusnegativt.<br />
8. Følgende aktuelle faderskabssag skal opklares:<br />
Moderens blodtype: A, Rh-<br />
Barnets blodtype: B, Rh+<br />
Mulige fædre:<br />
far nr.1: 0, Rh+<br />
far nr.2: B, Rh+<br />
far nr.3: AB, Rhfar<br />
nr.4: A, Rh+<br />
38
VUC Århus<br />
Eksperiment nr.:<br />
Lab.B11<br />
ELISA- test - Påvisning af "Kyssesyge"<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
39
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Øvelsevejledning: ELISA- test - Påvisning af "Kyssesyge".<br />
Relevant baggrundstof:<br />
Kendskab til immunforsvaret, antigener og antistoffer, mikroorganismernes opbygning (bakterier<br />
og virus).<br />
Teori:<br />
Har man mistanke om at en person er smittet med en infektionssygdom f.eks. mononukleose<br />
(kyssesyge), borrelia-bakterien (bid fra Skovflåt) eller HIV-virus, kan man benytte en antistoftest<br />
kaldet ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay).<br />
ELISA-testen bruges til at undersøge om en person har dannet antistoffer mod et bestemt antigen.<br />
Et antistof kan binde sig til et specifikt antigen, denne egenskab benyttes til at påvise om en<br />
person indeholder et specifikt antigen eller et specifikt antistof. En negativ test viser, at personen<br />
ikke har dannet antistoffer mod den pågældende virus eller bakterie. En positiv test viser, at<br />
personen har dannet antistof i kroppen.<br />
Antistofferne kan inddeles i 5 forskellige klasser. To af disse er særlig interessante IgM, som<br />
optræder ved førstegangsinfektioner og IgG, der er en del af den immunologiske hukommelse.<br />
Man kan designe sin ELISA test, så der testes for både IgM og IgG. På denne måde er det muligt at<br />
afgøre om der er tale om en ny infektion eller personen er blevet smittet for længe siden.<br />
Antigener er stoffer eller organisme, som fremkalder en antistofreaktion i kroppen.<br />
Antigener er ofte fremmede proteiner, men alle fremmede stoffer kan i princippet virke<br />
som mulige antigener.<br />
Antistoffer er proteiner, som dannes af immunforsvarets celler, og deres opgave er at<br />
binde sig til indtrængende fremmedstoffer (antigener). Antistof-antigenkomplekset<br />
optages af de såkaldte makrofager.<br />
Mononukleose (kyssesyge):<br />
Infektiøs mononukleose, eller "kyssesyge", skyldes en virus ved navn Epstein-Barr virus (EBV). Det<br />
er en DNA virus som hører til gruppen af "Herpes vira", men den har intet at gøre med<br />
forkølelsessår eller genital herpes.<br />
Infektionen kaldes kyssesyge, fordi smitten overføres via inficeret spyt. Det kan ske enten ved kys<br />
eller ved luftbåren smitte. Som det gælder for andre herpesvirusinfektioner forbliver virus i<br />
kroppen resten af livet, selvom man sandsynligvis kun vil få mononukleose én gang i livet. Virus<br />
kan formentlig med mellemrum findes i spyttet og sprede smitte denne vej.<br />
Sygdommen rammer specielt 15 til 25-årige og giver influenzalignende symptomer med<br />
halsbetændelse og hævelse af lymfeknuder og milt. Sygdommen er hyppigt forekommende;<br />
mellem 80 og 90 % af voksenbefolkningen har haft sygdommen.<br />
Sygdommen er i langt de fleste tilfælde ufarlig og uden senere komplikationer. Eventuelle<br />
komplikationer til mononukleose kan være forstørret milt, forstørret lever og en udpræget<br />
træthed. I sådanne tilfælde anbefaler man, at patienten undgår hårdt fysisk arbejde og sport med<br />
kropskontakt til ca. 4 uger efter sygdomsophør, da der kan ske skader på milten. Indtagelse af<br />
40
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
alkohol bør undlades i op til et halvt år på grund af sygdommens påvirkning af leveren.<br />
Diagnosen for mononukleose stilles ud fra de ovennævnte symptomer og sygdommens udvikling.<br />
Desuden kan lægen supplere med en podning fra halsen eller en blodprøve for påvisning af akut<br />
Epstein-Barr virus infektion (Monospot test) eller påvisning af antistoffer tydende på en tidligere<br />
infektion.<br />
Der findes ingen behandling rettet direkte mod Epstein-Barr virus. Behandlingen er derfor rettet<br />
mod sygdommens symptomer.<br />
Udover ovennævnte kendes en række andre sygdomme, som virus sættes i forbindelse med. Her<br />
kan nævnes Burkitt's lymphoma (en form for lymfekræft), kræft i næse/svælg, AIDS,<br />
autoimmunsygdomme og kronisk træthedssyndrom.<br />
Formål:<br />
Ved hjælp af ELISA-testen skal vi teste fire "hypotetiske" patienter, for mononukleose. Dette gøres<br />
ved at undersøge om patienternes "serum" indeholder immunoglobuliner af typen IgG rettet mod<br />
Eppstein-Barr virus (antigener).<br />
Serum= blodplasma, hvor størkningsfaktorerne er fjernet.<br />
Princippet bag fremstilling af ELISA-testen:<br />
ELISA testen udføres på en plastikplade med en række små brønde. Princippet er, at man<br />
fastklæber antigener fra EBV-virus på brøndens bund og sider. Herefter tilsættes serum med<br />
eventuelle antistoffer (IgG) fra patienten. Disse antistoffer vil binde til antigenerne.<br />
For at påvise antigen-antistof komplekset tilsættes endnu et antistof. Dette antistof binder til IgG<br />
som, når det bindes, aktiverer et enzym. Det aktive enzym kan påvises ved at tilsætte et specielt<br />
substrat, som ved reaktion udløser en kraftig farvereaktion.<br />
Materialer til forsøget.<br />
Varmeskab til inkubering af prøver ved 37 ° C<br />
En plastplade med 8 brønde<br />
En automatpipette/mikropipette 0-50 µL og 0-250µL<br />
Spidser til pipette<br />
Bæger til affald<br />
Bægerglas til brugte spidser<br />
Bægerglas med 10 mL fosfatbufferopløsning (PBS)<br />
8 Eppendorf rør med prøverne A-H :<br />
41
VUC Århus<br />
Oversigt over indholdet i prøverne A-H:<br />
Lab.B11<br />
Rør Indhold Mærket som Kommentar<br />
A 0,5mL EBV antigener EBV<br />
B 75µL Positiv kontrol + Indeholder IgG<br />
C 75µL Donor 1 serum DS1 Serum fra patient<br />
D 75µL Donor 2 serum DS2 Serum fra patient<br />
E 75µL Donor 3 serum DS3 Serum fra patient<br />
F 75µL Donor 4 serum DS4 Serum fra patient<br />
G+PBS 0,5mL Sekundær antistof 2'anti Antistof mod IgG +enzym<br />
H 0,4mL Substrat substrat Substrat til reaktion med enzym<br />
* Til læreren: opløsningerne A-F kan laves i forvejen.<br />
Metode:<br />
Udførsel af testen trin for trin.<br />
OBS DET ER VIGTIGT AT BRUGE RENE SPIDSER HVER GANG.<br />
Påsætning af antigener.<br />
1. Start med at mærke brøndene 1-6 (2 brønde er i overskud)<br />
2. Tilsæt 50µL EBV fra rør A til hver af brøndene 1-6 og inkuber ved stuetemperatur i 5<br />
minutter.<br />
3. Sug forsigtigt væsken op af brøndene (går til affald).<br />
4. Vask hver brønd en gang med PBS (fosfatbuffer opløsning). Dette gøres ved, forsigtigt, at<br />
fylde 250µL PBS i brønden. Fjern herefter væsken og smid den ud (affald). Undgå at spilde<br />
i brønden ved siden af.<br />
Påsætning af prøver.<br />
Tilsæt nu følgende til brøndene 1-6 HUSK AT SKIFTE SPIDSER.<br />
brønd 1. 50 µL PBS<br />
brønd 2. 50 µL fra rør B<br />
brønd 3. 50 µL fra rør C<br />
brønd 4. 50 µL fra rør D<br />
brønd 5. 50 µL fra rør E<br />
brønd 6. 50 µL fra rørF<br />
(fosfatbuffer opløsning/neg.kontrol)<br />
+ (+ positiv kontrol)<br />
DS1<br />
DS2<br />
DS3<br />
DS4<br />
42
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
Inkubering af prøverne.<br />
• Prøverne sættes i varmeskab til inkubering ved 37 ° C i 15 minutter.<br />
• Efter inkubering fjernes væsken forsigtigt fra brøndene (HUSK ny spidser)<br />
• Hver brønd vaskes med 250 µL PBS- se under punkt 4 (under påsætning af antigener)<br />
Tilsætning af sekundær antistof.<br />
• Tilsæt nu 50 µL "2'anti" til alle 6 brønde<br />
• inkuber prøverne ved 37 ° C i 15 minutter.<br />
• Efter inkubering fjernes væsken fra hver brønd med hver sin spids (affald)<br />
• Hver brønd vaskes med 250 µL PBS- se under punkt 4 (under påsætning af antigener)<br />
.<br />
Tilsætning af substrat.<br />
• Tilsæt 50 µL "substrat" til alle 6 brønde<br />
• Inkuber prøverne ved 37 ° C i 5 minutter.<br />
• Analyser prøverne ved at iagttage farvereaktion efter ca. 5 minutter.<br />
Kommentar til reaktionen mellem de sekundære antistoffer/ enzym og substratet.<br />
De sekundære antistoffer (2'anti), som bruges i reaktion er fremstillet ved immunisering med<br />
human IgG i kanin eller ged. Efter oprensning kobles enzymet peroxidase på anti-IgG (2'anti).<br />
Peroxidase omdanner brintoverilte 2 H 2 O 2 → 2H 2 O + O 2<br />
Peroxidase er et enzym med en meget høj katalytisk aktivitet, idet det kan omdanne 10 6 molekyler<br />
per sekund.<br />
Substratet som tilsættes prøven består af H 2 O 2 og et stof kaldet ABTS, som har den egenskab, at<br />
det i oxyderet tilstand bliver grønt.<br />
Når substratet tilsættes begynder peroxidasen straks at nedbryde H 2 O 2 og der dannes herved O 2<br />
som kan oxydere ABTS. ABTS bliver herved grøn.<br />
ABTS : azino-diethylbenzthiazoline sulfonate.<br />
43
VUC Århus<br />
Rapportvejledning:<br />
Lab.B11<br />
Teori:<br />
1. Beskriv funktionen af de forskellige celler i immunforsvaret.<br />
2. Gør rede for hvordan immunforsvarets hukommelse virker.<br />
3. Gør rede for hvordan et antistof er opbygget<br />
Materialer/metode: Skriv kun hvis der er ændringer til øvelsesvejledningen<br />
Resultat:<br />
Tag et foto af jeres resultater og gør rede for hvilke patienter, der er smittet med mononukleose.<br />
Diskussion:<br />
1. Forklar, princippet bag den reaktion man ser, når resultatet af testen er positiv.<br />
2. Forklar, hvorfor kontrolforsøget i brønd 2 giver positivreaktion.<br />
3. Forklar, hvorfor man har et kontrolforsøg, hvor der kun tilsættes PBS.<br />
4. Når man udfører ELISA testen i praksis testes der både for IgM og IgG. Endvidere<br />
bestemmer man hvor kraftig farven er. Jo kraftigere farven er, des flere antistoffer har<br />
testpersonen i sit blod.<br />
Forklar hvordan disse oplysninger kan være med til at klarlægge sygdomsforløbet.<br />
5. Giv eksempler på hvordan smitte generelt kan overføres fra person til person.<br />
6. Hvorfor kan vi kun i nogen tilfælde vaccinere effektivt mod virus infektioner?<br />
Fejlkilder: Angiv hvilke fejlkilder der er i forsøget.<br />
Konklusion:<br />
44
VUC Århus<br />
Eksperiment nr.:<br />
Lab.B11<br />
Mitosen - den almindelige celledeling<br />
Rapporten er udført af:<br />
I samarbejde med:<br />
Dato:<br />
Rettet af:<br />
45
VUC Århus<br />
Øvelsesvejledning: Mitosen - den almindelige celledeling.<br />
Lab.B11<br />
Relevant baggrundstof:<br />
Cellens opbygning, cellens cyklus, den almindelige celledeling - mitosen, de genetiske<br />
grundbegreber som: gener, alleler, kromatider og kromosomer.<br />
Teori:<br />
Der er to former for celledeling, den almindelige celledeling (mitosen) og den celledeling der fører<br />
til dannelsen af kønsceller (meiosen). I denne øvelse skal vi beskæftige os med mitosen.<br />
Formålet med mitosen er at skabe nye celler, som er identiske med den oprindelige celle. Denne<br />
form<br />
for celledeling sker i organismen, når den vokser eller i forbindelse med udskiftning af slidte celler.<br />
Inden celledelingen kopieres cellens arvemateriale, DNA, det betyder at kromosomerne nu findes i<br />
en struktur, som består af to ens DNA strenge også kaldet kromatider. Kromatiderne holdes<br />
sammen ved hjælp af et såkaldt centromer.<br />
Under celledelingen adskilles kromatiderne og føres til hver sin ende i cellens cytoplasma (cellens<br />
pol), herefter deles cellens cytoplasma og der dannes ny membran omkring de to nye celler.<br />
Celledelingen består således af tre vigtige trin:<br />
• Kopiering af arvematerialet (DNA)<br />
• Adskillelse af de to kopier (kromatiderne)<br />
• Deling af cellens cytoplasma<br />
Formål:<br />
I denne øvelse skal man ved hjælp af mikroskopet se og identificere de forskellige faser i mitosen.<br />
Der fremstilles et mitose præparat af løgceller i deling eller der kan bruges faste<br />
mitosepræparater.<br />
Anvend figuren side 3<br />
Materialer:<br />
Rødder fra rødløg eller hyacinter i god vækst<br />
Objektglas, dækglas<br />
1% orcein i 45% eddikesyre (færdiglavet)<br />
Spritbrænder<br />
Præparernål<br />
Filterpapir<br />
Mikroskop<br />
Metode:<br />
Det er muligt selv at fremstille et mitose præparatet. Dette gøres ved at tage en rodspids i vækst<br />
f.eks. fra løg, bønnespirer eller hyacinter. Den yderste spids er rodens vækstzone og her vil der<br />
hele tiden være celler i deling fordi roden vokser. Ved at farve rodspidsen med orcein kan man<br />
farve cellens DNA og cellens kromosomer bliver på denne måde synlige i mikroskopet.<br />
Fremstilling af mitosepræparat:<br />
46
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
1. Der skæres 1-2 mm af rodspidsen - en rodspids i god vækst kendes på, at den har en mælket<br />
zone.<br />
2. Rodspidsen overføres til et objektglas med en dråbe orcein (1% i 45% eddikesyre) og findeles<br />
med en præparernål. Herefter lægges et dækglas på så farven ikke fordamper.<br />
3. Præparatet opvarmes til ca. 60°C over en spritflamme (det må ikke koge). Ved opvarmningen<br />
bliver cellerne bløde og midtlamellen opløses.<br />
4. Læg nu et stykke filterpapir stramt ud over glasset og bank forsigtigt på dækglasset med enden<br />
af præparernålen. Efterfulgt af et kraftigt tryk med tommelfingeren. På denne måde opnår<br />
man at sprede cellerne.<br />
5. Cellerne er nu klar til mikroskopet.<br />
Brug af mikroskopet:<br />
Husk altid at stille skarpt inden der skiftes forstørrelse ellers ødelægger man præparatet og<br />
mikroskopet.<br />
1. Fastgør præparatet i klemmen på mikroskopets bord.<br />
2. Vælg den forstørrelsen/objektivet mærket 4x (dette svarer til en forstørrelse på 40x)<br />
47
VUC Århus<br />
Lab.B11<br />
3. Søg rundt i præparatet og konstater at cellerne har forskelligt udseende. Det er<br />
cellekernens indhold der er stærkt farvet Læg mærke til den tydelige celleafgrænsning som<br />
er cellevæggen.<br />
4. Find dernæst de faser som ser interessante ud.<br />
5. Læg den valgte celle i centrum af synsfeltet.<br />
6. Stil skarpt.<br />
7. Skift herefter til den næste forstørrelse (10x) herefter kan man skifte til (60x)<br />
Iagttag og tegn:<br />
Læg det færdige præparat under mikroskopet og find så mange forskellige faser i mitosen som<br />
muligt.<br />
Faserne tegnes og navngives. Prøv at beskriv fasen så nøjagtig som muligt ved at bruge<br />
betegnelser som tidlig metafase, sen osv. Prøv også at iagttage om cellen ses fra polen eller ind fra<br />
siden.<br />
48
VUC Århus<br />
Rapportvejledning:<br />
Lab.B11<br />
Teori:<br />
Beskriv kort cellens livscyklus<br />
Gør rede for kromosomernes opbygning.<br />
Forklar hvordan DNA kopierer sig selv inden celledeling (replikation)<br />
Materiale/metode: Skriv kun hvis der er ændringer i forhold til vejledningen.<br />
Resultater: Vedlæg dine tegninger af de forskellige faser i celledelingen.<br />
Diskussion:<br />
Rapporten skal indeholde en besvarelsen af de følgende spørgsmål.<br />
I de følgende spørgsmål er der kun et rigtigt svar pr. spørgsmål:<br />
1. Resultatet af en mitotisk celledeling er……..<br />
a. 4 genetisk helt identiske celler.<br />
b. 2 kønsceller, der hver for sig er genetisk forskellige.<br />
c. 2 genetisk helt identiske celler.<br />
d. 4 genetisk forskellige kønsceller.<br />
2. Mitosens funktion er at……<br />
a. give genetisk information uforandret videre.<br />
b. sørge for, at individer af samme art ikke bliver genetisk forskellige.<br />
c. overflødiggøre kønnet formering.<br />
d. sørge for, at individer af forskellig art ikke kan få afkom sammen.<br />
3. Hvad er et kromosom?<br />
a. En gruppe gener ordnet efter størrelse.<br />
b. En struktur, der findes i cellekernen og som er opbygget af DNA.<br />
c. Et stykke DNA, der koder for et bestemt protein.<br />
d. En struktur i cellernes cytoplasma, hvor m-RNA aflæses og proteinerne dannes.<br />
4. Hvad er et gen?<br />
a. Et stykke DNA, der koder for et bestemt artsspecifikt kulhydrat.<br />
b. Et overfladeprotein på en bakterie, en viruspartikel eller en svampecelle.<br />
c. Et stykke DNA, der koder for ét bestemt protein.<br />
d. Det modsatte af et antigen.<br />
5. Allele gener er …..<br />
a. alle de gener, der tilsammen styrer en bestemt egenskab.<br />
b. alle generne på et givet kromosom.<br />
c. gener, der er placeret samme sted på to homologe kromosomer og som styrer<br />
den samme egenskab.<br />
d. to ens gener, der gør deres bærer homozygotisk.<br />
På nedenstående fotos ses forskellige faser i mitosen, som de ser ud i mikroskopet.<br />
49
VUC Århus<br />
Se godt på billederne og sæt kryds ud for de korrekte udsagn - der må sættes flere krydser.<br />
Lab.B11<br />
Mellem to celledelinger befinder cellen sig i interfasen.<br />
I interfasen - sker en fordobling af DNA <br />
- kan man tydeligt se kromosomerne <br />
- arbejder cellen <br />
- forsvinder kernemembranen <br />
Første fase i mitosen kaldes profasen.<br />
I profasen - opløses kernemembranen <br />
- er kromosomerne fordoblede <br />
- vokser cellen <br />
Metafasen kaldes også midtfasen.<br />
I metafasen - kan man tydeligt se kromosomerne <br />
- dannes der tentråde <br />
- kan man se tentrådene <br />
- ligger kromosomerne i ækvatorplanet <br />
- mangler cellemembranen <br />
Anafasen er den smukkeste fase i mitosen.<br />
I anafasen - adskilles kromatiderne <br />
- gendannes kernemembranen <br />
-<br />
- kromatiderne føres mod cellens poler <br />
- består kromosomet af en DNA-streng <br />
Telofasen er den sidste fase i mitosen.<br />
I telofasen - deles cellens cytoplasma <br />
- gendannes kernemembranen <br />
- kan man stadig se kromosomerne <br />
- er cellen blevet dobbelt så stor <br />
- dannes der ny cellemembran <br />
50