Centriprep® centrifuge- filteranordninger - Millipore

Brugervejledning
Centriprep® centrifugefilteranordninger
Centriprep® 10K- og 30K-anordninger
til in vitro-diagnostisk brug
Centriprep® 3K- og 50K-anordninger udelukkende
til forskningsbrug; ikke til brug i diagnostiske procedurer
Dansk
Introduktion
Centriprep® centrifugefilteranordninger er ultrafiltreringsanordninger til engangsbrug, som anvendes
til oprensning, koncentrering, afsaltning og filtrering af biologiske prøver i volumenintervallet 2–15 mL.
Ultrafiltreringsanordningerne er klar til brug og er beregnet til anvendelse i de fleste centrifuger, som
kan indeholde 50 mL-centrifugerør. De er nemme at bruge og giver mulighed for høj flowhastighed.
Centriprep® anordningen består af en prøvebeholder med en hætte med drejelås, en filtratopsamler med en
lavadsorberende Ultracel® celluloseregeneratmembran, samt en luftforseglingshætte til isolering af prøven.
Centriprep® anordningens udformning giver mulighed for, at filtrering og sedimentering af fine partikler
forekommer samtidigt uden tilstopning af membranen. Ved brug af Centriprep® 50K-anordningen kan
en 15 mL-prøve koncentreres til 0,6 mL på blot 20 minutter, og koncentrering af mindre volumener tager
endnu kortere tid. Høje koncentrationsfaktorer opnås på grund af membranens lave adsorptionsevne, og
en genfinding på over 90 % af retinerede makromolekylære opløste stoffer er typisk. Et indbygget fast stop
giver en endelig koncentreret prøvevolumen på 0,5–0,6 mL.
Fordele ved produktet
Med biologiske prøver giver Centriprep® centrifugefilteranordningerne mange fordele ved sammenligning
med koncentreringsteknikker som f.eks. kemisk bundfældelse, inddampning, frysetørring og dialyse.
Opsætningstiden er minimal, og anordningen centrifugeres simpelthen, indtil den ønskede koncentration er
opnået. Filtreringsprocessen er skånsom, så potentielle problemer, såsom prøvedenaturering og koncentrering
af buffersalte, undgås. Eftersom koncentrering og afsaltning foregår samtidigt inden i Centriprep®
anordningen, elimineres prøvetab som følge af overførsel af materialer. Udformningen er ideel til opløsninger,
der indeholder fint partikelmateriale, da filtreringen forgår i den modsatte retning af sedimenteringen,
hvorved tilstopning af membranen reduceres. Centriprep® anordningens alt-i-ét udformning giver desuden
yderligere sikkerhed, når der arbejdes med farlige prøver. Eftersom alle materialer er indeholdt i anordningen,
minimeres brugerens eksponering for biologiske risikomaterialer.
Centriprep® centrifugefilteranordninger
1

Tilsigtet brug
ADVARSEL: Centriprep® 10K- og 30K-anordningerne er til in vitro-diagnostisk brug.
Centriprep® 3K- og 50K-anordningerne er udelukkende til forskningsbrug og er IKKE
beregnet til brug ved diagnostiske procedurer.
Forskningsbrug: Centriprep® 3K-centrifugefilteranordninger kan anvendes til at koncentrere og afsalte
oligonukleotider, peptider, vækstfaktorer og små proteiner. Anvendelsesområder for Centriprep® 10K-,
30K- og 50K-anordningerne omfatter koncentrering og afsaltning af søjleeluater og gradientfraktioner,
som indeholder proteiner, enzymer og antistoffer; genfinding af biomolekyler fra cellekultursupernatanter,
lysater, ekstrakter eller andre biologiske prøver; oprensning af komponenter med lav molekylvægt (f.eks.
aminosyrer og antibiotika) fra fysiologiske væsker, celledyrkningsmedier eller fermenteringsvæsker.
In vitro-diagnostisk brug: Centriprep® 10K- og 30K-centrifugefilteranordningerne kan anvendes til
koncentrering af makromolekyler i serum, urin, cerebrospinalvæske og andre legemsvæsker, inden disse
væsker analyseres. Alle andre Centriprep® centrifugefilteranordninger er udelukkende til forskningsbrug og
må ikke anvendes ved diagnostiske procedurer.
Grænser for nominel molekylvægt
Centriprep® produktlinjen omfatter anordninger med følgende grænser for nominel molekylvægt (NMWL):
● Centriprep® 3K-anordning — 3.000 NMWL (gul membranholder)
● Centriprep® 10K-anordning — 10.000 NMWL (grøn membranholder)
● Centriprep® 30K-anordning — 30.000 NMWL (klar membranholder)
● Centriprep® 50K-anordning — 50.000 NMWL (lyserød membranholder)
Komponenter i Centriprep® anordningen
Luftforseglingshætte
Hætte med drejelås
Udluftningsrille
Filtratopsamler, runding
Filtratopsamler
Membranholder
Prøvebeholder
Påfyldningslinje
2 Centriprep® centrifugefilteranordninger

Polariseringskontrol
Påkrævet udstyr
Centriprep® anordninger kan centrifugeres i en centrifuge med variabel hastighed med enten en
udsvingsrotor eller en vinkelrotor og en centrifugeholder, der kan holde 50 mL-centrifugerør. Centrifugen
skal have kapacitet til 500–3.000 × g. Der findes en liste over kompatible centrifuger og rotorer på
www.millipore.com/rotorguide.
Begrænsninger
Med vinkelrotorer kan polariseringskontrollen blive negativt påvirket ved lave g-værdier (under 2.000 × g).
Filtratflowet kan være reduceret, afhængigt af prøvesammensætning og koncentrationen af opløste stoffer.
Ved brug af begge centrifugetyper må følgende grænser ikke overskrides, da for kraftig g-påvirkning kan
forårsage lækage eller beskadigelse af anordningen.
Anordning Maksimal centrifugalkraft
Centriprep® 3K og 10K 3.000 × g
Centriprep® 30K og 50K 1.500 × g
Opbevaring og holdbarhed
For at opnå optimale resultater skal Centriprep® anordninger opbevares ved 15–30 °C. Ydelsen kan blive
påvirket negativt, hvis anordningerne opbevares ved ekstreme temperaturer (dvs. under 0 °C eller over
40 °C). Holdbarheden er tre år fra fremstillingsdatoen. Se udløbsdatoen på emballagens mærkat.
Forskylning
Centrifugalkraft
Filtrering
Polariseringslag
Membranerne i Centriprep® centrifugefilteranordningerne indeholder spormængder af glycerin. Hvis dette
interfererer med analysen, fyldes anordningen med ca. 15 mL buffer eller deioniseret vand og centrifugeres,
indtil det første ligevægtspunkt nås. Dekanter filtrat og koncentrat. Gentag efter behov, indtil der ikke
længere forekommer interferens. Når membranerne først er blevet våde, skal de fortsat holdes våde for at
blive ved med at fungere.
Centriprep® centrifugefilteranordninger
Filtrering
Udsvingsrotor Vinkelrotor
3

Udseende af membran og anordning
● Ubrugte Centriprep® anordninger kan lejlighedsvist have nogle få dråber fugt i filtratopsamleren eller
prøvebeholderen. Det skyldes kondensation af fugt i membranen og påvirker ikke ydelsen.
● Efter centrifugering er der muligvis en lille mængde (ca. 0,5 mL) filtrat tilbage i området mellem
membranen og membranholderen på Centriprep® anordningen. Dette er normalt og påvirker ikke
anordningens drift eller ydelse.
● Ultracel® membranen, som anvendes i Centriprep® centrifugefilteranordningerne, kan have et let
rynket udseende efter centrifugering.
Genbrug af centrifugefilteranordningen
Centriprep® anordninger er udelukkende til engangsbrug. Forsøg på at rengøre anordningen kan beskadige
membranens overflade eller forseglingen, hvorved enhedens integritet kan blive kompromitteret og ydelsen
forringet.
Betjeningsprincipper
For at begynde betjening skal prøvebeholderens hætte med drejelås løsnes og filtratopsamleren tages
af. Prøven tilsættes, hvorefter filtratopsamleren forsigtigt sættes tilbage i prøvebeholderen (hvorved
opløsningen fortrænges), og hætten låses, så anordningen forsegles. Den samlede centrifugefilteranordning
centrifugeres ved 1.000–3.000 × g, afhængigt af den anvendte membrans NMWL.
Nedsænkning af filtratopsamleren i prøveopløsningen skaber et let hydrostatisk trykdifferentiale, som
udøver et opadgående opdriftstryk på membranen ved filtratopsamlerens bund. Det hydrostatiske tryk, som
udøves af den fortrængte opløsning, er i sig selv for svagt til at frembringe ultrafiltrering. Centrifugeringen
forøger dette tryk og tvinger materialer med lav molekylvægt og opløsningsmiddel gennem membranen ind
i filtratopsamleren. Opløste stoffer med molekylvægte over membranens NMWL forbliver i prøvebeholderen
og koncentreres i stigende grad, efterhånden som centrifugeringen fortsætter. Ultrafiltreringen
forekommer i den modsatte retning af centrifugalkraftens vektor.
Trykdifferentialet, som skabes af det forhøjede opløsningsniveau, er vigtigt for centrifugefilteranordningens
funktion. Under centrifugeringen falder prøveopløsningens menisk i takt med, at filtratmenisken stiger. I
løbet af denne proces mister filtratopsamleren sin opdrift og synker til bunden af prøvebeholderen, hvilket
giver mulighed for maksimal filtratopsamling. Til sidst opnås der en ligevægt, hvor meniskerne når den
samme højde. Derefter standser filtreringen, da den hydrostatiske trykforskel nu er nul.
Hvis yderligere koncentrering er påkrævet, dekanteres filtratet, inden anordningen centrifugeres endnu en
gang. Dekantering genetablerer trykdifferentialet mellem prøvemenisken og filtratmenisken, hvilket tillader
filtreringen at blive genoptaget. Filtreringen fortsætter, indtil der opnås et nyt ligevægtspunkt. Bemærk, at
trykdifferentialet ændrer sig konstant under betjeningen i takt med, at meniskerne stiger og falder.
Centriprep® centrifugefilteranordninger er udformet til at opretholde høje flowhastigheder ved at minimere
ophobning af opløste stoffer på membranen under drift. Centrifugalkraften tvinger materialer med høj
massefylde til at synke væk fra membranen til prøvebeholderens bund. Eftersom Centriprep® membranen
“flyder” over dette polariseringslag, anvendes hele membranens overflade hele tiden, og filtratflowet er
ubegrænset. Dette er især nyttigt, når der arbejdes med suspensioner, som let kan tilstoppe eller forurene
en membran.
4 Centriprep® centrifugefilteranordninger

Anvendelse af Centriprep® centrifugefilteranordningerne
Adskil anordningen og
tilsæt prøve indtil påfyldningslinjen.
Saml anordningen
igen og anbring den
i centrifugen.
Centrifuger
for at
koncentrere
Centrifuger, indtil
opløsningsniveauerne
har udlignet sig.
1. Drej prøvebeholderens hætte med drejelås mod uret, og skub så filtratopsamler/hætte-enheden ud og
sæt den til side.
FORSIGTIG: Sørg for ikke at berøre, ridse eller beskadige membranen på bunden af filtratopsamleren
under adskillelse, fyldning og samling af anordningen.
2. Hæld opløsning i prøvebeholderen. Linjen på beholderens side markerer den maksimale
påfyldningsvolumen på 15 mL. Denne volumen må ikke overskrides.
BEMÆRK: For opløsninger med partikelmateriale, såsom cellesuspensioner, vil en startvolumen på
over 5 mL medføre reducerede flowhastigheder. For at opnå optimale resultater, når der
arbejdes med en prøve med over 10 % faste stoffer, skal den indledende prøvevolumen
begrænses til 5 mL eller derunder.
3. Sæt hætten med drejelås helt fast på filtratopsamlerens runding. Om nødvendigt skubbes hætten
nedad, indtil den stopper på rundingen.
4. Indsæt forsigtigt filtratopsamleren med hætten på i prøvebeholderen, og skub forsigtigt ned således,
at opsamleren fortrænger opløsningen. Drej hætten med drejelås med uret for at forsegle prøvebeholderen.
Endelig skal det sikres, at luftforseglingshætten sidder godt fast på hætten med drejelås.
5. Sæt den samlede Centriprep® anordning ind i centrifugen og dan modvægt med en lignende
anordning.
FORSIGTIG: Kontrollér, at udsvingsrotorerne har tilstrækkeligt frirum inden centrifugering. Enhver
forhindring kan forårsage beskadigelse af Centriprep® anordningen og muligt tab af
prøve. For at opnå øget frirum kan Centriprep® anordningen anvendes i adaptere uden
gummipuder.
6. Centrifuger Centriprep® anordningen ved den korrekte g-påvirkning, indtil væskeniveauerne inden i og
uden for filtratopsamleren udlignes. Ved anvendelse til koncentrering henvises til retningslinjerne for
opnåelse af forskellige koncentrationsvolumener, som er beskrevet i afsnittet “Koncentreringstider for
fortyndede proteinopløsninger” herunder.
7. Hvis der er behov for yderligere koncentrering efter udligning, fjernes anordningen fra centrifugen, og
luftforseglingshætten tages af. Dekanter filtratet med udluftningsrillen vendt opad. Sæt hætten på
igen og centrifuger anordningen endnu en gang. Ved anvendelse til filtrering skal filtratet sættes til
side.
8. Efter den anden centrifugering dekanteres det resterende filtrat. Hvis der er behov for yderligere
koncentrering, centrifugeres anordningen igen. Ellers gås videre til trin 9.
9. Løsn hætten med drejelås (drej den mod uret) og tag filtratopsamleren ud. Træk prøven ud ved brug af
en pipette eller hæld koncentratet i en egnet beholder.
Centriprep® centrifugefilteranordninger
Vend udluftningsrillen opad
og dekanter filtratet. Centrifuger
igen.
Centrifuger
for at
koncentrere
Adskil, og genfind
koncentrat.
5

Typiske koncentreringstider for fortyndede proteinopløsninger
Startvolumen
Centrifugeringstid (min)
i anordningen
og koncentratvolumen (mL)
Centriprep® 3K Første
Anden
Tredje
centrifugering centrifugering centrifugering
min mL min mL min mL
5 mL 50 1,2 10 0,8 10 0,5
10 mL 65 2,0 10 1,0 10 0,5
15 mL 95 3,1 35 1,2 10 0,6
Centriprep® 10K Første
centrifugering
Anden
centrifugering
Tredje
centrifugering
min mL min mL min mL
5 mL 15 1,3 10 0,6 I/R
10 mL 30 2,1 10 1,0 5 0,5
15 mL 40 3,2 10 1,2 5 0,5
Centriprep® 30K Første
centrifugering
Anden
centrifugering
Tredje
centrifugering
min mL min mL min mL
5 mL 5 1,3 5 0,8 5 0,5
10 mL 10 2,4 5 1,2 5 0,4
15 mL 15 3,2 10 1,1 5 0,5
Centriprep® 50K Første
centrifugering
Anden
centrifugering
Tredje
centrifugering
min mL min mL min mL
5 mL 5 1,4 5 1,0 5 0,6
10 mL 10 2,2 5 1,1 5 0,6
15 mL 10 3,4 5 1,3 5 0,6
Centrifugeringsbetingelser og proteiner anvendt i undersøgelser af
koncentreringstid
Anordningens
NMWL 3K 10K 30K 50K
Protein Cytochrom c,
0,25 mg/mL
Bovint serumalbumin,
1 mg/mL
Bovint serumalbumin,
1 mg/mL
Bovint serumalbumin,
1 mg/mL
g-påvirkning 3.000 × g 3.000 × g 1.500 × g 1.500 × g
Udsvingsrotor, 25 °C
I/R = ikke relevant, tredje centrifugering ikke påkrævet
6 Centriprep® centrifugefilteranordninger

Ydelse
Flowhastigheder og genfindingskarakteristika for Centriprep® centrifugefilteranordningerne er blevet testet
med adskillige velkendte opløste stoffer. Disse resultater, som er sammenfattet i de følgende afsnit, kan
benyttes til at anslå ydelsen med andre opløste stoffer.
Relativ centrifugalkraft (RCF) måles ved filtratopsamlerens base og beregnes som følger:
RCF = 1,118 × 10 -5 × radius × (RPM) 2
Radius = afstand i centimeter, målt fra omdrejningspunktets midte til filtratopsamlerens base
RPM = omdrejninger pr. minut.
Bemærk: RCF og RPM er ikke det samme (dvs. 3.000 × g svarer IKKE til 3.000 RPM). Se centrifugens
brugsanvisning for oplysninger om konvertering af g-værdier til RPM, eller brug ovenstående
formel.
Flowhastighed
Filtreringshastigheden påvirkes af flere forskellige driftsparametre, herunder prøvekoncentration,
startvolumen, relativ centrifugalkraft, anvendt rotortype, membranens NMWL og temperatur. Ved
koncentrering af fortyndede opløsninger giver udsvings- og vinkelrotorer sammenlignelige flowhastigheder.
For opløsninger, der indeholder over 10 % faste partikler, resulterer en startvolumen på over 5 mL typisk
i reducerede flowhastigheder. En volumen på 5 mL eller derunder producerer de højeste flowhastigheder,
fordi det begrænser mængden af faste stoffer, som kan samle sig på og blænde membranen.
Centrifugeringstiderne skal forlænges, når der arbejdes ved lave temperaturer. Ved 4 °C er
flowhastighederne ca. 1,5 gang langsommere end ved 25 °C. Tyktflydende opløsninger kan ligeledes kræve
længere centrifugeringstider. For eksempel ville en BSA-opløsning på 1 mg/mL i 50 % glycerin være fem
gange så lang tid om at koncentreres som det samme protein i en vandig bufferopløsning, ved brug af
Centriprep® 10K-anordningen.
Retention og genfinding
De anisotropiske, hydrofile membraner i Centriprep® centrifugefilteranordningerne er kendetegnet ved en
grænse for nominel molekylvægt, dvs. deres evne til at afvise molekyler over en specificeret molekylvægt.
Da det er en nem parameter at arbejde med, anvendes molekylvægt ved klassificering af membranpermeabilitet
og -selektivitet baseret på resultater opnået med velkarakteriserede proteiner.
Molekylvægt er imidlertid muligvis ikke gyldig for alle opløste stoffer. For eksempel kan retentionsevnen
være større for et globulært molekyle end for et lineært molekyle, som har samme nominelle molekylvægt.
Indvirkningen af pH og ionstyrke på et molekyles dimensioner og adfærd i en given opløsning skal ligeledes
tages i betragtning ved vurderingen af et opløst stofs retentionsevne.
Lav genfinding af opløst stof i koncentratet kan pege på muligheden af adsorptionstab og/eller passage af
det opløste stof gennem membranen. Adsorptionstab afhænger af det opløste stofs koncentration, stoffets
karakteristika (hydrofobt eller hydrofilt), temperatur, kontakttid med komponentflader, prøvesammensætning
og pH.
Centriprep® centrifugefilteranordninger
7

Typisk koncentratgenfinding
Opløst stof & startkoncentration
Nominel
molekylvægt
Centriprep® koncentratgenfinding i %
3K 10K 30K 50K
IgG Fr. II (1 mg/mL) 156.000 – – – 99
Bovint serumalbumin (1 mg/mL) 67.000 – 97 98 93
Ovalbumin (1 mg/mL) 45.000 – 95 90 –
α-Chymotrypsinogen (1 mg/mL) 25.000 94 93 – –
Cytochrom c (0,25 mg/mL) 12.400 96 96 8 4
Vitamin B12 (0,2 mg/mL) 1.355 12 – 5 –
15 mL startvolumen, 25 °C, udsvingsrotor
Resultater baseret på anbefalede centrifugeringstider, som anført i afsnittet “Koncentreringstider for
fortyndede proteinopløsninger”.
Typisk proteingenfinding, Centriprep® 30K-anordning
Koncentration % koncentratgenfinding ± 1 SD
100 µg/mL 98,2 ± 1,7
1.000 µg/mL 96,6 ± 0,2
15 mL startvolumen, 25 °C, udsvingsrotor, 1.500 × g
Bovint serumalbumin, to 25 minutters-centrifugeringer
Afsaltning
Ved afsaltning eller opløsningsmiddeludveksling koncentreres prøven, indtil ligevægtspunktet er nået.
Filtratet bortskaffes, hvorefter prøven rekonstitueres til den oprindelige volumen ved tilsætning af et egnet
opløsningsmiddel og vortex-blanding. Prøven koncentreres derefter og rekonstitueres endnu engang. Denne
proces gentages, indtil koncentrationen af de kontaminerende mikropartikler er tilstrækkeligt reduceret.
Følgende teoretiske eksempel illustrerer processen med prøveafsaltning:
Procestrin Prøvevolumen Proteinkoncentration NaCl-koncentration
Indledende prøve 15 mL 1 mg/mL 500 mM
Centrifuger for at koncentrere 3 mL 5 mg/mL 500 mM
Rekonstituer tilbage til 15 mL
med 10 mM NaCl
Centrifuger for at koncentrere/
afsaltning 1
Rekonstituer tilbage til 15 mL
med 10 mM NaCl
Centrifuger for at koncentrere/
afsaltning 2
Rekonstituer tilbage til 15 mL
med 10 mM NaCl
Centrifuger for at koncentrere/
afsaltning 3
15 mL 1 mg/mL 108 mM
3 mL 5 mg/mL 108 mM
15 mL 1 mg/mL 29,6 mM
3 mL 5 mg/mL 29,6 mM
15 mL 1 mg/mL 13,9 mM
3 mL 5 mg/mL 13,9 mM
8 Centriprep® centrifugefilteranordninger

Oversigter over ydelse
Typiske filtreringsprofiler for Centriprep® anordninger, der benytter almindelige,
fortyndede proteinopløsninger
Centriprep® 3K-
anordning
Driftsparametre:
● g-påvirkning: 3.000 × g
● temperatur: 25 °C
● udsvingsrotor
● opløst stof: 0,25 mg/mL
cytochrom c
5, 10 og 15 mL
startvolumener
Filtrat dekanteret på de
angivne tidspunkter
Centriprep® 10Kanordning
Driftsparametre:
● g-påvirkning: 3.000 × g
● temperatur: 25 °C
● udsvingsrotor
● opløst stof: 1 mg/mL
bovint serumalbumin
5, 10 og 15 mL
startvolumener
Filtrat dekanteret på de
angivne tidspunkter
Koncentratvolumen (mL)
Koncentratvolumen (mL)
Centriprep® centrifugefilteranordninger
Centrifugeringstid (min)
Centrifugeringstid (min)
9

Oversigter over ydelse, fortsat
Centriprep® 30Kanordning
Driftsparametre:
● g-påvirkning: 1.500 × g
● temperatur: 25 °C
● udsvingsrotor
● opløst stof: 1 mg/mL
bovint serumalbumin
5, 10 og 15 mL
startvolumener
Filtrat dekanteret på de
angivne tidspunkter
Centriprep® 50Kanordning
Driftsparametre:
● g-påvirkning: 1.500 × g
● temperatur: 25 °C
● udsvingsrotor
● opløst stof: 1 mg/mL
bovint serumalbumin
5, 10 og 15 mL
startvolumener
Filtrat dekanteret på de
angivne tidspunkter
Koncentratvolumen (mL)
Koncentratvolumen (mL)
Centrifugeringstid (min)
Centrifugeringstid (min)
10 Centriprep® centrifugefilteranordninger

Kvantitetsbestemmelse af genfindinger
Beregn samlet genfinding, procentvis koncentratgenfinding og procentvis filtratgenfinding ved brug af
nedenstående metode. Denne procedure giver desuden en nær tilnærmelsesværdi for genfindinger for
opløsninger med koncentrationer på op til ca. 20 mg/mL.
BEMÆRK: Egnede analyseteknikker omfatter absorptionsspektrofotometri, radioimmunoassay,
refraktionsindeks og konduktivitet.
Vejningsprocedure
Massefylden for de fleste fortyndede proteiner er næsten lig med massefylden for vand (dvs. 1 g/mL). Ved
at benytte denne egenskab kan koncentrat- og filtratvolumener kvantitetsbestemmes ved at veje dem
og konvertere enhederne fra gram til milliliter. Denne teknik er udelukkende gyldig for opløsninger med
koncentrationer på ca. 20 mg/mL eller derunder.
1. Inden brug vejes prøvebeholderen og et tomt testrør (15 mL kapacitet).
2. Fyld prøvebeholderen med opløsning og vej den igen.
3. Saml centrifugefilteranordningen og centrifuger i henhold til vejledningen. Dekanter filtratet til et
testrør, der er vejet på forhånd. Hvis yderligere koncentration er påkrævet, centrifugeres endnu en
gang og filtratet dekanteres til testrøret med det første filtrat. Vej testrøret plus filtrat(er) igen.
4. Adskil anordningen og vej prøvebeholderen plus koncentrat igen.
5. Træk vægten af det tomme testrør eller den tomme prøvebeholder fra for at beregne vægten af
≤≤≤iale, filtrat og koncentrat.
6. Analysér startmaterialet, filtratet og koncentratet for at bestemme koncentrationen af opløst stof.
7. Beregn genfindinger ved brug af vægt/volumen-data og de målte koncentrationer som følger:
Wc × Cc % koncentratgenfinding = 100 ×
Wo × Co Wf × Cf % filtratgenfinding = 100 ×
Wo × Co % samlet genfinding = % koncentratgenfinding + % filtratgenfinding
W c = samlet vægt af koncentrat inden analyse
W o = vægt af oprindeligt startmateriale
W f = vægt af filtrat
C c
= koncentratkoncentration
C o = koncentration af oprindeligt startmateriale
C f = filtratkoncentration
Centriprep® centrifugefilteranordninger
11

Specifikationer
Prøvebeholderens kapacitet 15 mL
Endelig koncentratvolumen ved 25 °C 0,5-0,6 mL
Filtratopsamlerens kapacitet 12 mL
Maksimal relativ centrifugalkraft
Centriprep® 3K-anordning 3.000 × g
Centriprep® 10K-anordning 3.000 × g
Centriprep® 30K-anordning 1.500 × g
Centriprep® 50K-anordning 1.500 × g
Aktivt membranområde 2,84 cm 2
Volumen af væskeindhold (membran og holder) 0,5 mL
Dimensioner
Diameter af hætte med drejelås 36,5 mm (hætten har sin plads uden
for centrifugeholderen)
Diameter af prøvebeholder 28,1 mm
Længde 135 mm
Fremstillingsmaterialer
Membran Ultracel® celluloseregenerat
Prøvebeholder Polycarbonat
Membranholder Polycarbonat
Filtratopsamler Polycarbonat
Hætte med drejelås Nylon
Luftforseglingshætte Polypropylen
12 Centriprep® centrifugefilteranordninger

Kemisk kompatibilitet
Centriprep® anordninger er beregnet til brug med biologiske væsker og vandige opløsninger. Inden brug skal
det kontrolleres, at prøven er kemisk kompatibel med anordningen. Alle opløsninger, som er anført i nedenstående
tabel, er blevet evalueret med henblik på kemisk kompatibilitet med Centriprep® anordninger.
Syrer Koncentration Koncentration
Eddikesyre ≤ 80 % Saltsyre ≤ 1,0 N
Fosforsyre ≤ 30 % Svovlsyre ≤ 3 %
Mælkesyre ≤ 50 % Trifluoreddikesyre (TFA) ≤ 50 %
Myresyre ≤ 50 % Trikloreddikesyre (TCA) ≤ 10 %
Salpetersyre ≤ 10 %
Baser
Ammoniumhydroxid ≤ 5 % Natriumhydroxid ≤ 0,1 N
Alkoholer
Ethanol ≤ 70 % Methanol ≤ 60 %
Isopropanol ≤ 70 % n-Butanol ≤ 90 %
Rengøringsmidler
Alconox® rengøringsmiddel ≤ 1 % PyroCLEAN rengøringsmiddel 1:10
Lubrol® PX-rengøringsmiddel ≤ 0,1 % Tergazyme® rengøringsmiddel ≤ 1 %
Natriumdeoxycholat ≤ 5 % Triton® X-100-tensid ≤ 0,002%
Natriumdodecylsulfat (SDS) ≤ 2 % Tween® 20-tensid ≤ 0,1 %
Nonidet P-40-tensid ≤ 2 %
Organiske opløsningsmidler
Acetone ikke anbefalet Ethylacetat ikke anbefalet
Acetonitril ≤ 30 % Formaldehyd ≤ 5 %
Benzen ikke anbefalet Kloroform ikke anbefalet
Carbontetraklorid ikke anbefalet Pyridin ikke anbefalet
Dimethylformamid ≤ 50 % Tetrahydrofuran ikke anbefalet
Dimethylsulfoxid (DMSO) ≤ 5 % Toluen ikke anbefalet
Dioxan ikke anbefalet
Diverse
Ammoniumsulfat Mættet Imidazol ≤ 100 mM
Diethylpyrocarbonat ≤ 0,2 % Mercaptoethanol ≤ 0,1 M
Dithiothreitol (DTT) ≤ 0,1 M Natriumcarbonat ≤ 20 %
Fenol ≤ 1 % Natriumthiocyanat ≤ 3 M
Fosfatbuffer (pH 8,2) ≤ 1 M Polyethylenglykol ≤ 10 %
Glycerin ≤ 70 % Tris-buffer (pH 8,2) ≤ 1 M
Guanidin-HCl ≤ 6 M Urea ≤ 8 M
Guanidinthiocyanat ≤ 0,5 M
Centriprep® centrifugefilteranordninger
13

In vitro-diagnostisk produktmærkning
Følgende tabel definerer de symboler, som findes på Centriprep® 10K- og 30K-anordningernes mærkater.
Symbol Definition Symbol Definition
V In vitro-diagnostisk medicinsk udstyr N Fremstillingsdato
h Katalognummer M Producent
D Må ikke genbruges l Temperaturbegrænsning
H Anvendes før d Usterilt produkt
g Batchkode C CE-overensstemmelsesmærkning
Oplysninger om produktbestilling
Dette afsnit indeholder katalognumrene for Centriprep® ultrafiltreringsanordninger. Se afsnittet Teknisk
assistance vedrørende kontaktoplysninger. Disse produkter kan købes online på
www.millipore.com/products.
Beskrivelse 24/pk. 96/pk.
Til in vitro-diagnostisk brug
Centriprep® 10K-anordning (10.000 NMWL) 4304 4305
Centriprep® 30K-anordning (30.000 NMWL) 4306 4307
Kun til forskningsbrug
Centriprep® 3K-anordning (3.000 NMWL) 4302 4303
Centriprep® 50K-anordning (50.000 NMWL) 4310 4311
Bemærkning
Oplysningerne i dette dokument kan ændres uden varsel og skal ikke opfattes som en forpligtelse for Merck
Millipore Ltd. (“Millipore”) eller en affilieret virksomhed. Hverken Merck Millipore Ltd. eller dets affilierede
virksomheder påtager sig ansvaret for fejl, der måtte forefindes i dette dokument.
Teknisk assistance
Kontakt den nærmeste afdeling for at få flere oplysninger. Opdaterede globale kontaktoplysninger findes
på vores websted på www.millipore.com/offices. Man kan også besøge vores tekniske serviceside på vores
websted på www.millipore.com/techservice.
Standardgaranti
Den gældende garanti på de i denne publikation angivne produkter kan findes på www.millipore.com/terms
(under punktet “Terms and Conditions of Sale” for den relevante købstransaktion).
14 Centriprep® centrifugefilteranordninger

Fremstillet i Irland
Merck Millipore Ltd.
Tullagreen,
Carrigtwohill,
Co. Cork, IRL
M-logoet er et varemærke, der tilhører Merck KGaA, Darmstadt, Tyskland.
Millipore, Centriprep og Ultracel er registrerede varemærker, der tilhører Merck KGaA.
Alconox og Tergazyme er registrerede varemærker, der tilhører Alconox, Inc.
Lubrol er et registreret varemærke, der tilhører Imperial Chemical Industries PLC.
Nonidet er et varemærke, der tilhører Royal Dutch/Shell Group.
PyroCLEAN er et varemærke, der tilhører ALerCHECK, Inc.
Triton er et registreret varemærke, der tilhører Union Carbide Corp.
Tween er et registreret varemærke, der tilhører ICI Americas Inc.
© 2012 EMD Millipore Corporation. Alle rettigheder forbeholdes.
PR03522TR, Rev. A, Dansk, 03/12
Centriprep® centrifugefilteranordninger
15
C
I
F
T
G
K
P
P
B
O
F
U
G
B
A
T
Y
O
K
S
K
I
O
B
T
S