ЛЕСНЫЕ И ПОЛЕВЫЕ МЫШИ Молекулярно-генетические ...

Молекулярная эволюция, филогения и систематика по данным полиморфизма длин...чаемостью их сайтов рестрикции. Были выбраны рестриктазыAlul, TagI, Csp6I и Bglll, места узнавания которых (AGCT, TCGA,GTAC и AGATCT соответственно) могли произойти от одноготетрануклеотида путем мультипликаций и инверсий. Посколькуодин из сайтов включен в блок нуклеотидов, узнаваемый нуклеазойHindlll-(AAGCTT), которая маркирует сатДНК лесных мышей,мы надеялись более подробно охарактеризовать именно сателлитнуюфракцию генома — общепризнанный молекулярныймаркер в эволюционных и филогенетических исследованиях. Такойнабор ферментов позволял нам также апробировать дифференцированныйподход в выборе рестриктаз (узнающие сайты с четырьмятипами азотистых оснований по сравнению с GC-специфичными)для изучения сателлитной фракции генома грызунов.Нуклеаза Alul гидролизует ДНК лесных мышей на множествомелких фрагментов, образуя яркие дискретные полосы лишь вгеномах европейских видов. Эти дискретные полосы, по всей видимости,включают в себя последовательности ДНК, гомологичныеранее выявленному в геномах лесных мышей Hindlllсателлиту,так как Alul-блок нуклеотидов входит в состав Hindlllсайтарестрикции (Cooke, 1975). Количество сатДНК в дискретныхAlul-и HindIII-фрагментах коррелирует, увеличиваясь в рядуS. sylvaticus, S. uralensis и S. flavicollls. На картинах рестрикциисатДНК S. sylvaticus представлена в основном одним Alul-фрагментомдлиной 375 пн, a S. flavicollls и S. uralensis — тремя, значительноболее яркими, с размерами 375, 200, 175 пн и 350, 200,150 пн соответственно. В геноме S. uralensis регистрируется низкомолекулярныйкомпонент, состоящий примерно из 20—30 пн.Таким образом, HindIII-повторы сатДНК как S. sylvaticus, так иS. uralensis (в отличие от S. flavicollls) практически полностьюрасщепляются рестриктазой Alul. Однако строго фиксированныеAlul-сайты характерны только для сатДНК последних двух видов:один сайт на последовательность сатДНК S. flavicollls(200+175 пн фрагменты) и два сайта — S. uralensis (200+150+20 пнФрагменты). Следовательно, и внутригеномный полиморфизм, ичисло AGCT-сайтов в повторе сатДНК увеличиваются в рядуS- flavicollls, S. uralensis, S. sylvaticus, т. е. находятся в обратноПропорциональной зависимости с количественными характеристикамиданной фракции (см. выше) и, очевидно, прямо пропорциональныэволюционному возрасту.47